發(fā)布時(shí)間：2022-01-05 23:19

　　背景:HLA基因是目前已知的最復(fù)雜的人類(lèi)基因系統(tǒng),具有高度的多態(tài)性,其基因區(qū)域僅占人全基因組大小0.13%,卻與100多種疾病相關(guān),主要在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、免疫功能紊亂、疾病易感性、癌癥以及藥物反應(yīng)等方面。對(duì)HLA基因的分型,能促進(jìn)理解疾病的因果關(guān)系,以及促進(jìn)移植醫(yī)學(xué)的發(fā)展。而高分辨率的HLA分型結(jié)果對(duì)自身免疫性疾病和感染性疾病的治療具有重要意義。在移植醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,HLA基因的高分辨率分型也極為重要,如果供體與受體之間的HLA配型不合,那么將引發(fā)器官或骨髓移植后產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)。建立大規(guī)模HLA高分辨率分型數(shù)據(jù)庫(kù),也是移植醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和精準(zhǔn)醫(yī)療領(lǐng)域所必須的。盡管目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)了很多基于第二代測(cè)序技術(shù)的HLA分型方法,但由于低效率、步驟復(fù)雜和高成本的原因,限制了這些方法成為群體水平的高通量HLA分型手段。第三代測(cè)序技術(shù)單分子測(cè)序方法能對(duì)接近20 kb的序列進(jìn)行測(cè)序,能實(shí)現(xiàn)超高分辨率的HLA分型。而傳統(tǒng)的PCR方法在獲得用于第三代測(cè)序文庫(kù)時(shí)具有潛在的如嵌合或斷缺的風(fēng)險(xiǎn),因此,高質(zhì)量文庫(kù)的獲得對(duì)實(shí)現(xiàn)超高分辨率的HLA分型至關(guān)重要。結(jié)果:基于上述原因,我們開(kāi)發(fā)了一種成本低廉的瓦狀壘疊靶向捕獲測(cè)序技術(shù)來(lái)... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１．１?ＨＬＡ基因位置示意圖（圖片引自［７］）

ＢＫＤ２?ｖ－，如ｄ＇．??圖１．?１．３?ＨＬＡ基因的功能（圖片引自［１］）。??ＨＬＡ最主要的功能之一是對(duì)蛋白質(zhì)抗原的處理與遞呈。病毒抗原或腫瘤抗原等內(nèi)源性??抗原，在降解成肽段后與ＨＬＡ－?Ｉ類(lèi)抗原分子結(jié)合后呈遞到細(xì)胞表面，供ＣＤ８＂＂Ｔ細(xì)胞識(shí)別。??而由非自身細(xì)胞產(chǎn)生的外源性抗原降解而成的肽段

圖１．３．?１直接測(cè)序法和基于ＮＧＳ進(jìn)行ＨＬＡ分型的實(shí)驗(yàn)流程（圖片引自ｔ４°］）。Ａ．基于一代??測(cè)序的ＨＬＡ分型方法流程。如果分型結(jié)果出現(xiàn)摸棱兩可的情況，涉及到２－３輪驗(yàn)證。Ｂ．??基于二代測(cè)序的ＨＬＡ分型方法。一次性獲得多個(gè)基因的高分辨率分型結(jié)果。??１．３．?１下一代測(cè)序技術(shù)的原理及應(yīng)用??自２００３年人類(lèi)基因組計(jì)劃完成之后，測(cè)序技術(shù)發(fā)展迅猛，多種測(cè)序產(chǎn)品在市場(chǎng)上出??現(xiàn)，接受市場(chǎng)的檢驗(yàn)。而下一代測(cè)序技術(shù)脫穎而出。下一代測(cè)序技術(shù)又被稱(chēng)為二代測(cè)序技??術(shù)或高通量測(cè)序技術(shù)，這是相對(duì)于一代測(cè)序技術(shù)（Ｓａｎｇｅｒ?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）而言的。與一代??測(cè)序每個(gè)反應(yīng)只能測(cè)一條且最多為１０００?ｂｐ的堿基相比，二代測(cè)序技術(shù)能一次性并行對(duì)幾??百萬(wàn)到幾千萬(wàn)的短序列ＤＮＡ分子（ｒｅａｄｓ）進(jìn)行測(cè)序（３００－６００?ｂｐ），這使得二代測(cè)序技術(shù)??在處理大規(guī)模樣品時(shí)具有顯著的優(yōu)勢(shì)，在測(cè)序速度及測(cè)序通量上具有無(wú)可取代的地位，是??組學(xué)研究如全基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)中的核心技術(shù)［４１］。??一一

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]枯草芽胞桿菌Bs-916的全基因組分析[J]. 王曉宇,羅楚平,陳志誼,劉永鋒,劉郵洲,聶亞鋒,于俊杰,尹小樂(lè).  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(23)



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