目的通過Nedl1（NEDD4-like ubiquitin protein ligase-1）基因敲除鼠(Nedl1^-/-)構(gòu)建匹魯卡品癲癇模型,探討Nedl1基因與癲癇之間的關(guān)系。方法 C57BL/6小鼠通過Cre-Loxp系統(tǒng)構(gòu)建Nedl1^-/-小鼠。選擇相同年齡野生型小鼠(Nedl1^+/+)及Nedl1^-/-小鼠,腹腔注射匹魯卡品誘導(dǎo)癲癇發(fā)作,對兩組小鼠癲癇發(fā)作情況進行統(tǒng)計,并且對比未造模時及癲癇模型建模1個月后兩組小鼠海馬Nissl染色、NPY（neuropeptide Y）染色。結(jié)果與Nedl1^+/+小鼠相比,Nedl1^-/-小鼠癲癇發(fā)作等級較輕（P=0.000）,癲癇發(fā)作次數(shù)較少（P=0.004）,首次出現(xiàn)3級以上發(fā)作的時間較長（P=0.016）。癲癇模型建模后Nedl1^-/-小鼠全部存活,而Nedl1^+/+小鼠死亡率為46.4%。癲癇模型建模后1個月Nissl染色顯示Nedl1^+/+

【文章來源】：解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2020,41(06)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

癲癇模型后1個月海馬NPY免疫熒光染色(n=3)

選擇Nedl1+/+小鼠(28只)和Nedl1-/-小鼠(17只)進行匹魯卡品癲癇模型制作,腹腔給藥后幾分鐘,小鼠出現(xiàn)活動減少,尾巴伸直、點頭、腹部貼地爬行、全身抖動,偶爾出現(xiàn)陣攣發(fā)作。通過對不同基因型的小鼠癲癇模型后2 h發(fā)作情況進行統(tǒng)計。癲癇發(fā)作等級:Nedl1-/-小鼠癲癇發(fā)作等級顯著低于Nedl1+/+小鼠(3.40±0.36 vs 3.90±0.16)(P=0.000);2 h內(nèi)3級及以上癲癇發(fā)作的次數(shù):Nedl1-/-小鼠癲癇發(fā)作次數(shù)顯著少于Nedl1+/+小鼠(13.05±7.84 vs 20.00±8.47)(P=0.004);首次出現(xiàn)3級以上發(fā)作的時間:Nedl1-/-小鼠所用時間明顯長于Nedl1+/+小鼠(42.23±15.48 vs 24.4±17.06)(P=0.016),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。癲癇模型后Nedl1-/-小鼠全部存活,而Nedl1+/+小鼠死亡13只(46.4%)(圖1)。2 癲癇模型后小鼠腦組織Nissl染色比較

選擇未造模及癲癇模型后1個月的Nedl1+/+小鼠和Nedl1-/-小鼠各組3只,取腦組織進行Nissl染色。癲癇模型后1個月,低倍鏡下觀察(40×)見Nedl1+/+小鼠與Nedl1-/-小鼠海馬區(qū)域整體結(jié)構(gòu)無明顯差異;高倍鏡下觀察(400×)可見Nedl1+/+小鼠CA1區(qū)、CA3區(qū)和DG區(qū)細(xì)胞著色增加,細(xì)胞排列紊亂,并且DG區(qū)的細(xì)胞明顯固縮,細(xì)胞形態(tài)改變。癲癇模型后1個月,Nedl1+/+小鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞計數(shù)明顯低于Nedl1-/-小鼠(P=0.03),并且較未造模時期明顯減少(P=0.01)。癲癇模型后1個月,Nedl1+/+小鼠及Nedl1-/-小鼠海馬CA3區(qū)、DG區(qū)細(xì)胞計數(shù)無明顯差異,與未造模時期相比無明顯變化(P>0.05)(圖2)。3 癲癇模型后小鼠腦組織NPY免疫熒光染色比較


本文編號：3484720