為闡明不同來(lái)源H7N9流感病毒誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素（IFN-Ⅰ）產(chǎn)生水平差異及其機(jī)制,本研究選取人源流感病毒A/Anhui/1/2013（AH/1）株和禽源流感病毒A/Pigeon/Shanghai/S1421/2013（PG/S1421）株作為模式病毒株,利用C57BL/6小鼠進(jìn)行致病性試驗(yàn)。結(jié)果顯示,AH/1株感染可以致小鼠發(fā)病死亡,而PG/S1421株則不會(huì)致小鼠發(fā)病。采用間接免疫熒光試驗(yàn)和流式細(xì)胞試驗(yàn)分別對(duì)兩株病毒在A549細(xì)胞和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中的感染效率進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示兩株病毒在兩種細(xì)胞中的感染效率無(wú)顯著差異。將該兩株病毒分別感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,在感染后不同時(shí)間點(diǎn)收集培養(yǎng)上清,并裂解細(xì)胞收取細(xì)胞總蛋白。采用ELISA方法對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN-Ⅰ含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示,感染后不同時(shí)間,AH/1株和PG/S1421株均可以誘導(dǎo)IFN-Ⅰ產(chǎn)生,但相較于PG/S1421株,AH/1株感染可以誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生更多的IFN-Ⅰ;利用western blot對(duì)細(xì)胞總蛋白中IFN-Ⅰ產(chǎn)生信號(hào)通路的上游感受器分子視黃酸誘導(dǎo)基因Ⅰ（RIG-Ⅰ）的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,在PG/S1421株感染細(xì)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2020,42(01)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

PG/S1421株和AH/1株對(duì)小鼠的致病性試驗(yàn)結(jié)果

分別通過(guò)IFA和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩株流感病毒PG/S1421和AH/1對(duì)不同宿主細(xì)胞的感染效率，IFA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩株病毒感染A549細(xì)胞和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的熒光數(shù)量和強(qiáng)度無(wú)明顯差別（圖2A），流式結(jié)果顯示兩株病毒感染兩種細(xì)胞后的感染細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯差別（p=0.5026和p=0.6379）（圖2B），表明兩株病毒在A549細(xì)胞和小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中的感染效率無(wú)差別。2.3 病毒感染細(xì)胞后IFN-β表達(dá)量的檢測(cè)結(jié)果

利用IFN-βELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)兩株病毒感染后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-β的蛋白含量。結(jié)果顯示，在感染后一定時(shí)間內(nèi)，兩株病毒均可以促進(jìn)細(xì)胞中IFN-β表達(dá)，并且IFN的表達(dá)量隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加（圖3），但是相較于PG/S1421,AH/1株能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的IFN-β，結(jié)合2.2中結(jié)果，兩株H7N9病毒對(duì)宿主細(xì)胞的感染效率不存在顯著差異，表明IFN含量差異不是由于感染效率不同引起的。2.4 病毒感染細(xì)胞后胞內(nèi)RIG-I表達(dá)量的檢測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]A型流感病毒逃避免疫應(yīng)答的策略[J]. 趙樸,鄭玉姝,喬傳玲,賈貝貝,劉興友.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2008(10)



本文編號(hào)：3483850