發(fā)布時間：2021-11-07 03:03

　　目的:以胰腺組織裂解液定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化,形成胰島樣結(jié)構(gòu)并對其進行評價,探究分化過程中細胞形態(tài)變化的規(guī)律;探討胰島樣結(jié)構(gòu)的形態(tài)變化與內(nèi)分泌功能的關(guān)系。方法:采用胰腺組織裂解液,誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞定向分化為胰島樣結(jié)構(gòu);倒置相差顯微鏡下觀察細胞、結(jié)構(gòu)的變化;以石蠟包埋切片并HE染色,觀察組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài);以雙硫腙染色對分化形成的細胞團進行初步篩選;Mallory染色鑒別細胞及分布;使用免疫細胞化學(xué)染色技術(shù)檢測Insulin、C-peptide、Glucagon、和Somatostatin蛋白;實時熒光定量PCR檢測Pdx1、Ngn3、MaFA、Nkx6.1、Insulin、Glucagon、Somatostatin、GLUT-2基因的表達;酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測細胞培養(yǎng)液中Insulin和C-peptide,以評價胰島樣結(jié)構(gòu)的分泌功能。結(jié)果:1.誘導(dǎo)分化過程中,細胞形態(tài)變化規(guī)律。誘導(dǎo)早期,散在的細胞增多并聚集成細胞團;細胞團收縮、細胞密度增加,逐漸形成有被膜包繞的結(jié)構(gòu)。2.胰島樣結(jié)構(gòu)內(nèi)可檢測到Insulin、C-peptide、Glucagon、Somatostatin陽性細胞... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

散在的細胞、簡單聚集的細胞團、收縮的細胞團、膜包的細胞團Insulin免疫熒光染色Fig.4-aInsulinimmunofluorescencestainingofscatteredcells,simpleaggregatedcellmass,contractedcellmass,andmembrane-packedcellmass.

43圖 4-b 散在的細胞、簡單聚集的細胞團、收縮的細胞團、膜包的細胞團 C-peptide 免疫熒光染色Fig. 4-b C-peptide immunofluorescence staining of scattered cells, simple aggregated cell mass, contractedcell mass, and membrane-packed cell mass.

45圖 4-c 散在的細胞、簡單聚集的細胞團、收縮的細胞團、膜包的細胞團 Glucagon 免疫熒光染色Fig. 4-c Glucagon immunofluorescence staining of scattered cells, simple aggregated cell mass, contractecell mass, and membrane-packed cell mass.

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]不同誘導(dǎo)劑定向誘導(dǎo)BMSCs分化為胰島樣結(jié)構(gòu)的比較[J]. 王慧豐,吳麗情,徐亦辰,韋雅淑,劉紅靜,趙文婧,陳維平.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2018(04)
[3]PDX-1基因轉(zhuǎn)染人脂肪間充質(zhì)干細胞向胰島樣細胞分化及移植治療1型糖尿病[J]. 史光軍,白國立,譚雪瑩,朱繼軍,許評.  中國組織工程研究. 2017(13)
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[5]體外定向誘導(dǎo)小鼠胰腺干細胞分化形成胰島樣結(jié)構(gòu)[J]. 吳麗情,寇亞麗,趙文婧,吳卓,徐亦辰,陳維平.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2015(12)
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[7]心肌組織裂解液誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞的分化[J]. 李琴,趙文婧,寇亞麗,胡利霞,陳維平.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2011(10)
[8]移植共培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞與胰島細胞對糖尿病大鼠的降血糖作用[J]. 李偉娟,田爍,劉閣玲,路一芳,肖紅珍.  吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2010(06)
[9]不同微環(huán)境對骨髓間充質(zhì)干細胞分化為產(chǎn)胰島素細胞的影響[J]. 黃盛,鄭偉,范志勇,張福琴,竇科峰,宋振順.  中華實驗外科雜志. 2008 (03)
[10]Mallory氏胰島細胞染色法的改良[J]. 柳潔,張雪梅,李莉.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展. 2007(12)

博士論文
[1]PDX-1、NeuroD1及MafA轉(zhuǎn)導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及小鼠iPS細胞制備胰島素分泌細胞的實驗研究[D]. 范向軍.蘇州大學(xué) 2013
[2]四種方案誘導(dǎo)人胎盤間充質(zhì)干細胞向胰島β樣細胞分化[D]. 陸琰.暨南大學(xué) 2009

碩士論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細胞分化為心肌細胞過程中GATA-4和a-MHC的表達[D]. 劉玲瓏.廣西醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]定向誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞向心肌細胞方向分化過程中Nkx2.5的表達[D]. 吳卓.廣西醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號：3481033