[目的]對金黃色葡萄球菌的Cna基因進行生物信息學(xué)分析,并進行克隆和原核表達,為金黃色葡萄球菌重組疫苗的研發(fā)提供參考數(shù)據(jù)。[方法]使用Protparam、PSORT、Signal P-5.0、TMpred、Net Phos 3.1 Server、PSIPRED、SWISSMODEL等在線生物信息軟件,分析Cna蛋白的理化性質(zhì)、亞細胞定位、跨膜區(qū)域、磷酸化修飾位點、二級結(jié)構(gòu)和三維結(jié)構(gòu)。以基因組DNA為模板擴增Cna基因編碼N1-N2子域的片段,擴增產(chǎn)物經(jīng)酶切回收后與載體p ET-32a（+）相連接,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒,將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli TG1,經(jīng)菌落PCR、測序鑒定后,增菌培養(yǎng)并抽提質(zhì)粒,再轉(zhuǎn)化E.coli BL21（DE3）,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達后進行SDS-PAGE分析。[結(jié)果]Cna蛋白由1 183個氨基酸殘基組成,相對分子質(zhì)量為133 006.82 Da,等電點為5.89,負電荷氨基酸殘基數(shù)為180個,正電荷氨基酸殘基數(shù)為167個,分子式:C5863H9241-N1569O1936S10,原子總數(shù)18 619個,是一種穩(wěn)定的親水蛋白質(zhì),定位于細胞膜上,第4～23、1 15... 

【文章來源】：生物技術(shù). 2020,30(04)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Cna的信號肽預(yù)測結(jié)果

在線生物分析軟件TMpred預(yù)測Cna蛋白跨膜區(qū)的結(jié)果顯示，該蛋白共有2個典型的跨膜螺旋區(qū)域，分別由第4～23位、第1 158～1 177位氨基酸殘基形成(圖2)。圖3 Cna蛋白的磷酸化位點預(yù)測結(jié)果

Cna蛋白的磷酸化位點預(yù)測結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]金黃色葡萄球菌青霉素結(jié)合蛋白PBPX基因的克隆與表達[J]. 李文通,盛佩群,羊曉敏,陳逸璐,何文迪,夏佳音,陳新江.  生物技術(shù). 2018(05)



本文編號：3468970