目的1研究內(nèi)皮源性27nt-mi RNA對主動脈血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）表型轉(zhuǎn)換及其相關(guān)分子機制。2探討內(nèi)皮源性27nt-mi RNA對主動脈血管平滑肌細胞增殖、遷移及凋亡等細胞功能的影響。方法1慢病毒構(gòu)建、轉(zhuǎn)染及VSMCs去分化模型的建立慢病毒由上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司根據(jù)相應(yīng)的mi RNA序列設(shè)計、構(gòu)建,經(jīng)PCR鑒定及DNA測序比對分析確定載體構(gòu)建成功后用慢病毒包裝載體形成27nt-mi RNA高表達、anti-27nt-mi RNA及陰性對照NC慢病毒液。將慢病毒分別轉(zhuǎn)染VSMCs后,熒光顯微鏡下觀察細胞綠色熒光表達情況以確定27nt-mi RNA細胞株建立情況。2檢測27nt-mi RNA對VSMCs表型轉(zhuǎn)換的影響根據(jù)實驗設(shè)計要求,將VSMCs隨機分五組:分別為正常對照組（normal）、PDGF-BB組、mimic 27nt-mi RNA+PDGF-BB組、Anti-27nt-mi RNA+PDGF-BB組、NC+PDGF-BB組。正常對照組的VSMCs不給予任何處理、PDGF-BB組的VSMCs用10 ng/... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

慢病毒載體結(jié)構(gòu)圖

方法SS 17.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以 X±S 表示，兩兩比，多組間比較采用單因素方差分析，進一步比較用.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。體外生長狀況條件下 VSMCs 呈長梭形或多角形，少部分形態(tài)為，胞漿豐富，胞質(zhì)密度高，核呈卵圓形居中。剛復(fù)而且生長速度較為緩慢，大約有 50% 的細胞貼壁隨著生長環(huán)境慢慢的改善，細胞的生長速度變快，排列成束，部分重疊，出現(xiàn)典型的“谷峰狀”生長（如

2019 屆碩士學(xué)位論文 內(nèi)皮源性 27nt-miRNA 對 VSMCs 表型轉(zhuǎn)換、增殖與凋亡的影響及相關(guān)機制研究3.2 慢病毒感染條件確定檢測 NC 慢病毒不同病毒滴度（MOI=30、50、70、80）感染 VSMCs后熒光表達強度確定感染條件，結(jié)果顯示隨著 MOI 值增加，細胞胞漿綠色熒光表達逐漸增強。MOI 為 30 時，極少量的細胞有微弱綠色熒光，MOI為 50 時，綠色熒光增強。當 MOI 為 80 時，細胞具有明顯可見的綠色熒光，感染效率可達 90% 左右，且細胞的生長狀態(tài)良好（見圖 1-3），說明 MOI=80 為 VSMCs 慢病毒感染的最佳實驗條件，可得到最佳轉(zhuǎn)染效率且不影響細胞生長活性。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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