高危型人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）的持續(xù)感染與宮頸癌、陰道癌、口腔癌等惡性疾病的發(fā)生相關,目前主要通過基于L1蛋白的HPV疫苗進行預防。而假病毒（Pseudovirus,PsV）的高效穩(wěn)定生產是相關預防性疫苗免疫保護性評價的重要環(huán)節(jié)。為初步探究PsV生產過程中各質粒的配比關系對不同型別PsV制備的影響。本實驗采用人乳頭瘤病毒的16型（HPV16）和18型（HPV18）兩種型別的相應質粒轉染細胞,編碼L1蛋白的質粒轉染質量固定為10μg,分別改變編碼L2蛋白質粒與EGFP報告質粒的轉染比例,通過計算PsV的TCID₅₀值、測定L1蛋白含量以及PsV的感染率對不同質粒轉染配比下的假病毒進行評估。結果顯示在HPV16PsV模型中,L1與L2轉染質量比為10μg∶2μg時,可以得到TCID₅₀較高的PsV,而當HPV18 PsV達到最大TCID₅₀時,L1與L2的配比為10μg∶1μg,其TCID₅₀略大于10μg∶2μg組;L1與L2比例為10μg∶2μg時兩種PsV皆... 

【文章來源】：病毒學報. 2020,36(05)北大核心CSCD

【文章頁數】：7 頁

【部分圖文】：

Qiagen試劑盒提取的質粒核酸電泳圖

TCID50測定結果顯示，在HPV16、HPV18 Ps V模型中，改變報告基因EGFP質粒轉染質量配比使得所產Ps V的TCID50及L1蛋白表達水平產生差異，但L1表達水平僅在HPV16 Ps V模型中表現出較強規(guī)律性（圖4):EGFP質粒轉染質量配比增大使得HPV16 Ps V的TCID50降低，但梯度配比6μg、8μg、10μg之間TCID50差異不顯著（paired T test,p分別為：0.1835、0.4226、0.4226），表明在EGFP取6μg～10μg時，所產假病毒均有較高TCID50值。另外，其L1蛋白表達水平隨EGFP質粒轉染配比上升呈顯著下降趨勢，表明所制備Ps V液體中Ps V顆粒減少，不利于HPV結構生物學研究樣品制備。HPV18 Ps V的TCID50隨EGFP質粒轉染配比上升先增后減，在配比為8μg時達到最大57252 TU/μL，其L1蛋白表達水平變化規(guī)律不明顯。圖3 不同L2質粒轉染配比下Ps V的感染率

不同L2質粒轉染配比下Ps V的感染率

【參考文獻】：
期刊論文
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