目的構(gòu)建SDF-1、HOXB4和SDF-1/HOXB4融合基因腺病毒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）,比較其對CD34+細(xì)胞體外擴(kuò)增及干性維持的影響。方法全基因合成SDF-1/HOXB4基因序列,以其為模板,經(jīng)PCR、酶切及測序鑒定,構(gòu)建表達(dá)SDF-1、HOXB4和SDF-1/HOXB4的3種腺病毒載體,轉(zhuǎn)染至293A細(xì)胞進(jìn)行包裝和病毒滴度測定,并轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的MSCs,分別為SDF-1組、HOXB4組和S-H組,轉(zhuǎn)染空腺病毒載體的為陰性對照,轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平檢測MSCs中外源基因表達(dá)。4組MSCs和CD34+細(xì)胞共培養(yǎng)7 d,計(jì)數(shù)細(xì)胞并檢測其CD34+表達(dá)。結(jié)果測序表明3種腺病毒載體構(gòu)建成功,在293A細(xì)胞中成功包裝并獲取病毒,RT-PCR和Western blot檢測3個(gè)基因在MSCs細(xì)胞中穩(wěn)定高表達(dá),MSCs和CD34+細(xì)胞共培養(yǎng),擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)目SDF-1組（9.52±2.24）、S-H組（8.11±2.34）顯著高于對照組（4.85±2.53,P<0.05）,S-H組（CD34+表達(dá)為1.85%）較SDF-1組... 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2013,35(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

種腺病毒載體SDF-1-IRES-EGFP(A)、HOXB4-IRES-EGFP(B)、SDF-1-(GlySer)

熒光顯微鏡與倒置顯微鏡觀察3種重組腺病毒轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞(×100)

流式細(xì)胞術(shù)檢測人MSCs細(xì)胞的表型結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3397202