目的本文研究EBI3蛋白與Sedlin蛋白間的相互作用,利用GST Pull-down和免疫共沉淀等方法探究了EBI3蛋白以及其截短體與Sedlin蛋白在體外和哺乳動物細胞中的的相互作用情況。同時研究Sedlin和EBI3在分泌過程中的相互影響。方法制備GST-Sedlin融合蛋白,并將含有FLAG標簽的EBI3、EBI3（1-135）和EBI3（125-230）的質粒分別轉染至HEK 293T細胞中,利用GST Pull-down探究EBI3蛋白和其截短體EBI3（1-135）、EBI3（125-230）與Sedlin蛋白在體外相互作用以及EBI3糖基化對相互作用的影響。將含有FLAG標簽的EBI3及其截短體EBI3（1-135）、EBI3（125-230）的質粒分別和含有GFP標簽以及HA標簽的Sedlin等質粒共同瞬時轉染至至HEK 293T細胞,用免疫共沉技術探究EBI3及其截短體EBI3（1-135）、EBI3（125-230）蛋白和Sedlin蛋白在細胞內的相互作用情況。將含有FLAG標簽的EBI3和含有HA標簽的Sedlin的質粒瞬時轉染至COS7細胞中,在細胞培養(yǎng)基上清... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

LPS刺激巨噬細胞后的培養(yǎng)基上清中EBI3蛋白的檢測

安徽醫(yī)科大學碩士畢業(yè)論文TCAGATGACGTTTTT，Sedlin-sh1-R: AATTAAAAACGTCATCTGACATACTCGAGTATGAACTGGTTCAGATGACG; Sedlin-sh2-F：GATAATCCAAAGACGACCATCTCGAGATGGTCGTCTTTGGATTCTGClin-sh2-R: AATT AAAAA GCAGAATCCA AAGACGACCA TCTCGAGTCTTTGGATTCTGC)用慢病毒包裝后，以不同的 MOI 感染 THP-1 rene 5 μg/ml)，感染 24 h 后換液，繼續(xù)培養(yǎng)至足夠細胞量后用 1 μg/m篩選，篩選 48 h 后換液收細胞 Western blot 檢測。結果表明感染后A3-Sedlin MOI=10 組的 Sedlin 被明顯敲低，將對應的細胞繼續(xù)培養(yǎng)并 Sedlin 蛋白的 THP-1 細胞株。


本文編號：3360007