采集健康豬股骨骨髓,利用percoll梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞,進(jìn)行體外原代和傳代培養(yǎng),并用不同代數(shù)細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞生長(zhǎng)能力、膜表面抗原（CD105、CD90、CD45）及誘導(dǎo)分化能力的檢測(cè)。結(jié)果顯示分離培養(yǎng)的單個(gè)核細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣及渦旋狀克隆團(tuán);細(xì)胞傳代至第17代生長(zhǎng)狀況仍然良好;用F 3代細(xì)胞進(jìn)行膜表面抗原標(biāo)記顯示,CD90和CD105陽(yáng)性表達(dá)率分別為（97.4±1.8）%和（99.6±0.9）%,而CD45陽(yáng)性表達(dá)率僅為（1.8±0.55）%,證實(shí)這些細(xì)胞具有豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem Cells,MSCs）表面抗原;經(jīng)地塞米松、維生素C和β-磷酸甘油等誘導(dǎo)F 3代細(xì)胞,21d后出現(xiàn)鈣物質(zhì)沉積細(xì)胞群,用茜素紅和Von kossa染色呈陽(yáng)性,證實(shí)這些細(xì)胞已分化形成成骨細(xì)胞;經(jīng)地塞米松、IBMX、胰島素及吲哚美辛等誘導(dǎo)F 3代細(xì)胞,21d后細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)脂滴樣結(jié)構(gòu),用油紅O染色呈陽(yáng)性,證實(shí)已分化形成成脂細(xì)胞;冷凍-解凍細(xì)胞的膜表面抗原及多能分化能力與未凍存細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果基本一致。結(jié)果證實(shí),從豬骨髓中分離培養(yǎng)及經(jīng)傳代擴(kuò)增獲得的貼壁細(xì)胞是純化的MSCs... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013,33(05)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

圖２豬ＭＳＣｓ生長(zhǎng)曲線(xiàn)

圖５豬ＭＳＣｓ表面抗原陽(yáng)性率９５％以上；解凍后的活細(xì)胞數(shù)分別為Ｆ３代（９０±２）％、Ｆ５代（８７±２）％、Ｆ１０代（７０±１）％、Ｆ１３代（６９±０．２５）％（圖８）。解凍后細(xì)胞接種第５天，ＭＳＣｓ形成了小的細(xì)胞克隆團(tuán)。解凍后的各代ＭＳＣｓ的表面抗原及分化能力均顯示正常。３討論本研究顯示，從豬骨髓中分離的單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)能夠貼壁生長(zhǎng)形成成纖維細(xì)胞樣及渦旋狀細(xì)胞克隆團(tuán)；細(xì)胞傳至第１７代生長(zhǎng)狀況仍然良好；經(jīng)ＭＳＣｓ膜表面抗原ＣＤ１０５和ＣＤ９０標(biāo)記，２種膜表面圖６豬ＭＳＣｓ成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定Ａ．Ｆ３代誘導(dǎo)第２１天ＭＳＣｓ的鈣結(jié)節(jié)；Ｂ．Ｆ３代誘導(dǎo)第２１天茜素紅染色；Ｃ．Ｆ３代誘導(dǎo)第１５天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色；Ｄ．Ｆ３代誘導(dǎo)第２１天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色圖７豬ＭＳＣｓ成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定Ａ．Ｆ３代成脂細(xì)胞誘導(dǎo)第１７天；Ｂ．Ｆ３代成脂細(xì)胞誘導(dǎo)第１７天油紅Ｏ染色７９２中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)２０１３年５月第３３卷第５期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＭａｙ２０１３Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．５

圖５豬ＭＳＣｓ表面抗原陽(yáng)性率９５％以上；解凍后的活細(xì)胞數(shù)分別為Ｆ３代（９０±２）％、Ｆ５代（８７±２）％、Ｆ１０代（７０±１）％、Ｆ１３代（６９±０．２５）％（圖８）。解凍后細(xì)胞接種第５天，ＭＳＣｓ形成了小的細(xì)胞克隆團(tuán)。解凍后的各代ＭＳＣｓ的表面抗原及分化能力均顯示正常。３討論本研究顯示，從豬骨髓中分離的單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)能夠貼壁生長(zhǎng)形成成纖維細(xì)胞樣及渦旋狀細(xì)胞克隆團(tuán)；細(xì)胞傳至第１７代生長(zhǎng)狀況仍然良好；經(jīng)ＭＳＣｓ膜表面抗原ＣＤ１０５和ＣＤ９０標(biāo)記，２種膜表面圖６豬ＭＳＣｓ成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定Ａ．Ｆ３代誘導(dǎo)第２１天ＭＳＣｓ的鈣結(jié)節(jié)；Ｂ．Ｆ３代誘導(dǎo)第２１天茜素紅染色；Ｃ．Ｆ３代誘導(dǎo)第１５天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色；Ｄ．Ｆ３代誘導(dǎo)第２１天Ｖｏｎｋｏｓｓａ染色圖７豬ＭＳＣｓ成脂細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定Ａ．Ｆ３代成脂細(xì)胞誘導(dǎo)第１７天；Ｂ．Ｆ３代成脂細(xì)胞誘導(dǎo)第１７天油紅Ｏ染色７９２中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)２０１３年５月第３３卷第５期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＭａｙ２０１３Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．５

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]梅山豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性分析[J]. 樊懿萱,張艷麗,楊岳,王子玉,宋輝,閆益波,鐘部帥,孟立,聶海濤,葛婷,王鋒.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2011(06)
[2]蒙古馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及多向分化潛能的研究[J]. 張焱如,劉宗正,韋林蓋,蘇小虎,趙一萍,芒來(lái).  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(10)

碩士論文
[1]山羊骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離與培養(yǎng)[D]. 華松.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3313287