神經(jīng)干細胞（neural stem cells,NSCs）具備自我更新的本領及分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細胞與少突膠質(zhì)細胞的潛能。在胚胎腦發(fā)育過程中,NSCs可以通過產(chǎn)生不同類型的神經(jīng)細胞保證神經(jīng)連接和腦功能的完整性和精確性。胚胎期NSCs發(fā)育異常是造成眾多新生患兒神經(jīng)管畸形、小頭畸形等出生缺陷的直接因素。目前,NSCs發(fā)育異常導致的先天缺陷是人類面臨的最為嚴峻的挑戰(zhàn)之一,給家庭和社會帶來了沉重負擔。除此之外,NSCs在特定條件和因子誘導下可以定向分化成不同類型神經(jīng)細胞,這為神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病和神經(jīng)損傷等提供了新的治療策略。因此對NSCs增殖、分化調(diào)控機制的研究是揭示臨床上常見中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育缺陷疾病致病機制的關鍵,同時也為一些神經(jīng)障礙疾病的治療提供新思路。本實驗室長期致力于胚胎發(fā)育缺陷疾病模型的建立和致病機理的研究。前期工作中篩選到含HMG-box結構域的蛋白TOX3,屬于TOX（thymocyte selection-associated HMG-box）家族成員。TOX3 在腦內(nèi)高表達,但現(xiàn)在在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的作用研究還較少。另外,p53誘導的內(nèi)源性糖酵解抑制因子TIGAR（TP53... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：150 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ＴＯＸ３在胚胎發(fā)育時期大腦皮層的表達情況

為了系統(tǒng)地分析Ｔ０Ｘ３在祌經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的功能及作用，我們構建了?ＴＯＸ３??基因敲除小鼠，通過將Ｔ０Ｘ３的４號外顯子剪接到ｌａｃＺ誘捕元件而破壞Ｔ０Ｘ３??基因的表達（圖２Ａ）。提取新生鼠鼠尾ＤＮＡ進行基因型鑒定，并對Ｔ０Ｘ３的敲??除效率進行檢測。通過Ｔ０Ｘ３?Ｃ末端特異性抗體的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析顯示純合敲??除小鼠中ＴＯＸ３蛋白顯著下降（圖２Ｂ）。ｑＰＣＲ結果顯示ＴＯＸ３ｍＲＮＡ也是下降??的（圖２Ｃ）。與同窩野生型鼠對比，Ｔ０Ｘ３全身敲除小鼠的敲除效率能達到？８０％，??純合敲除小鼠中檢測到的蛋白可能是由可變剪接引起的亞等位基因效應產(chǎn)生的。??３９??

通過對Ｔ０Ｘ３基因敲除小鼠進行表型觀察，發(fā)現(xiàn)ＴＯＸ３雜合子小鼠能夠存活??并且具有正常體型和生育能力，而純合敲除小鼠在出生后一天至一周內(nèi)死亡。出??生后第１天，敲除鼠的體型變小，體重和腦重減輕，腦外觀變小（圖３Ａ－Ｃ）。其??它器官如心臟、肝、肺等未見異常。??Ｂ．?Ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｗｅｉｇｈｔｓ?ａｔ?Ｐ１?Ｃ．丨抓??Ｂｒａｉｎ?＾ｌ］??Ｗｈｏｌｅ?ａｎｉｍａｌ?｜Ｌ?＇９＾?ＪｌＨ??圖３?Ｔ０Ｘ３基因敲除小鼠體重和腦重減輕。（Ａ）?ＰＩ天ＴＯＸ３敲除小鼠和ＷＴ小??鼠體型差異。（Ｂ）?Ｐ１天Ｔ０Ｘ３敲除小鼠和ＷＴ小鼠體重和腦重分析。（Ｃ）?Ｐ１??天ＴＯＸ３敲除小鼠和ＷＴ小鼠腦外觀大小。ｎ＝３。??３．?ＴＯＸ３基因敲除導致大腦皮層變薄??通過石蠟切片技術對Ｐ１天新生鼠進行冠狀腦切片，ＨＥ染色結果顯示與同??４０??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Lysine Acetylation and Deacetylation in Brain Development and Neuropathies[J]. Alicia Tapias,Zhao-Qi Wang.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2017(01)



本文編號：3268611