發(fā)布時間：2021-06-30 15:32

　　研究背景:蚊蟲傳播的病毒性疾�。∕osquito-borne viral diseases,MBVDs）對全球公共衛(wèi)生構(gòu)成了嚴重威脅,嚴重危害人類生命健康,影響社會的穩(wěn)定。蚊蟲防制仍然是綜合蚊蟲管理（Integrate mosquito management,IMM）計劃中的核心干預策略,以減少MBVDs的傳播。傳統(tǒng)的化學農(nóng)藥是目前使用最頻繁和最廣泛的控制蚊蟲的方法,然而,化學農(nóng)藥對生態(tài)系統(tǒng)造成了嚴重的負面影響,蚊蟲也出現(xiàn)了殺蟲劑抗性（Insecticide resistance,IR）問題,這使得開發(fā)新的蚊蟲防制方法至關(guān)重要。而生物殺蟲劑的研究與應用將為蚊蟲的防制提供新的策略。生物防制主要應用蚊蟲真菌,細菌、病毒等病原體、天敵等來達到防治效果,對非靶標生物和有益生物無毒害,不危害生態(tài)系統(tǒng),蚊蟲對其不易產(chǎn)生抗性。蚊濃核病毒（Mosquitodensovirus,MDVs）屬于蚊蟲特異性病毒,特異性感染蚊類,可以在自然界中垂直傳播和水平傳播。高滴度病毒可以直接殺傷蚊類,低滴度可以影響蚊類壽命、產(chǎn)卵量、孵化率等,從而降低媒介種群數(shù)量。目前多種MDVs的全基因組己經(jīng)成功構(gòu)建為感染性克隆質(zhì)粒載... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３．?ＡａｌＤＶ－７的基因組結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３．?ＡａｌＤＶ－７?ｇｅｎｏｍｅ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?

??結(jié)構(gòu)蛋白基因ＮＳ１和ＮＳ２和結(jié)構(gòu)蛋白基因ＶＰ的３＇ＲＡＣＥ?（圖１－４Ｃ）。如圖１－４Ｃ??所示，在ＶＰ３＇ＲＡＣＥ中僅檢測到明顯的條帶，經(jīng)過測序顯示多聚腺苷酸化開始??于ＶＰ基因翻譯終止密碼子ＴＡＡ的下游６０ｎｔ。此外，ＮＳ１／ＮＳ２?３’ＲＡＣＥ可擴??增出２５１１?ｂｐ的ＰＣＲ產(chǎn)物，經(jīng)測序分析，其與ＶＰ基因共有一個共同的ＴＴＳ。??由于ＮＳ１?／ＮＳ２和ＶＰ基因共有共同的轉(zhuǎn)錄起始位點，理論上可從ＶＰ?５＇ＲＡＣＥ??獲得２，３３６?ｂｐ的產(chǎn)物，但是在實驗中未能擴増出相應大小的條帶。因此，我們??通過ＲＴ－ＰＣＲ來確認總ＲＮＡ中確實存在該完整轉(zhuǎn)錄本（引物ＲＴＦ和ＲＴＲ），??結(jié)果與預期一致（圖卜４Ｄ）。??Ａ?ＲＴｆ??４?ＶＰ＾ＮＰ?ＷＰＳ＇Ｐ?ＲＴＲ??１?ＮＳ２?；?ＮＳ１?Ｉ?Ｉ?ＶＰ??ＮＳ３＿Ｐ?ＮＳ３．ＮＰ?ＶＰ３．Ｐ?ＶＰ３．ＮＰ??ｍＲＮＡ??■?｜??Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ｓｔａｒｔ?ｓｉｔｅ??Ｂ??５＇ＲＡＣＥ?Ｄ??ｊ?叮

１２?ｈ．ｐ．ｔ．后在ｐＶＰ－ＤｓＲｅｄ中的細胞中觀察到ＤｓＲｅｄ表達。在約４８?ｈ．ｐ．ｔ．后，??可以檢測到最大熒光強度�？梢杂^察到，ＮＳ１和ＮＳ２?ＤｓＲｅｄ融合表達蛋白均位??于Ｃ６／３６細胞的細胞核和細胞質(zhì)中，但主要位于細胞核中（圖１－７Ｂ）。三種蛋??白質(zhì)均勻分布在細胞核中（ｐＮＳｌ－ＤｓＲｅｄ和ｐＮＳ２－ＤｓＲｅｄ的上行圖片中），而ＮＳ１??和ＮＳ２在細胞核中也可呈現(xiàn)點灶狀分布（ｐＮＳｌ－ＤｓＲｅｄ和ｐＮＳ２－ＤｓＲｅｄ的下行圖??片中）。這些結(jié)果表明ＮＳｌ，?ＮＳ２和ＶＰ的ＮＬＳ確實發(fā)揮了核定位功能，將蛋??白質(zhì)從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)運到細胞核中。ＮＳ１和ＮＳ２在病毒ＤＮＡ復制過程中發(fā)揮作用，??而ＶＰ主要聚集到細胞核中用于病毒組裝。??Ａ?ｐＮＳｌ－ＤｓＲｅｄ?ｐＮＳ２－０ｓＲｅｄ??＼?ＩＲｓｌ?ＮＳ１?｜?ＮＳ２￣｜?ｉ?ＤｓＲｅｄ?ＴｌＲｓＮ?＜?ＩＲｓ｜?ＮＳ１?｜?ＮＳ２?ｊ?ＤｓＲｅｄ?！?ＩＲｓ＾＞??ｐＶＰ?ｐＶＰＮＬＳ－ＤｓＲｅｄ??，１?ｎ￣＼??ｖ?ＩＲｓ?ＮＳ１?ｌ?ＮＳ２?ＤｓＲｅｄ?｜ＪＲｓ〉??Ｂ??ＤＡＰ！?ＯｓＲｅｄ?Ｍｅｒｇｅ?ＤＡＰＩ?Ｏｓｆｉｅｄ?Ｍｅｒｇｅ??圖１－７．?ＡａｌＤＶ－７的ＮＳｌ，?ＮＳ２和ＶＰ蛋白的在Ｃ６／３６細胞的亞細胞定位??２４??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]蜚蠊防制中的高科技新生物技術(shù)——利用信息素誘引的蜚蠊病毒生物防制技術(shù)[J]. 岳木生,張令要.  中國媒介生物學及控制雜志. 2001(04)



本文編號：3258010