目的蠅類是一種重要的醫(yī)學(xué)媒介生物,攜帶大量的細(xì)菌病原體,可直接或間接地傳播疾病,與人類健康關(guān)系密切,因此對(duì)蠅類攜帶細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)分析,對(duì)于預(yù)防相應(yīng)疾病的發(fā)生與流行具有重要意義。目前蠅類攜帶細(xì)菌檢測(cè)方法的檢測(cè)效率均較低,能檢測(cè)出的細(xì)菌種類十分有限,無(wú)法反應(yīng)樣品攜帶細(xì)菌的實(shí)際情況;第二代測(cè)序技術(shù)測(cè)序通量高,一次測(cè)序并可得到來(lái)自樣品的全部核酸序列,為蠅類攜帶細(xì)菌的全面檢測(cè)提供了可能。本研究將第二代測(cè)序技術(shù)用于蠅類攜帶細(xì)菌多樣性的研究,旨在建立一種高效的蠅類細(xì)菌多樣性的檢測(cè)方法,為檢驗(yàn)檢疫工作提供參考。方法研究?jī)?nèi)容分為四個(gè)部分。第一部分,在振蕩洗脫法的基礎(chǔ)上,對(duì)蠅類攜帶細(xì)菌分離及收集方法進(jìn)行優(yōu)化,探究了兩個(gè)影響其收集效率的條件,分別為洗脫次數(shù)和洗脫液收集量,通過(guò)單一因素的控制變量法,以細(xì)菌DNA的收集效率為指標(biāo),并結(jié)合實(shí)際操作的繁瑣程度,得出最適洗脫次數(shù)和洗脫液收集量,從而得到一種簡(jiǎn)便高效的蠅類攜帶細(xì)菌的分離及收集方法。第二部分,比較了細(xì)菌的六種DNA提取方法,包括:磁珠法、熱裂解法、試劑盒法（有溶菌酶處理和無(wú)溶菌酶處理）、超聲波法和超聲+熱裂解法;以10種細(xì)菌的等量混合液作為樣品,用六種方法分... 

【文章來(lái)源】：廣東藥科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

洗脫次數(shù)與DNA收集量關(guān)系圖

洗脫效率最高。圖 2.1 洗脫次數(shù)與 DNA 收集量關(guān)系圖2.2.2 最佳洗脫液收集量由圖可知，n=1 時(shí)，Qn=26.36％，當(dāng) n 取其他值時(shí)，Qn值在 7％~9％之間波動(dòng)，表明從上之下依次吸取細(xì)菌洗脫液時(shí)，最下面一層細(xì)菌洗脫液中細(xì)菌含量最大，可達(dá) 26.36％，而其余 9 層細(xì)菌含量較小，且含量相差不大，取值在 7％~9％之間。由 Mn值繪制的折線圖可知

M：DNAMarker；（每種方法設(shè)置三個(gè)平行樣品，共 18 個(gè)然六種方法所提取出的 DNA 純度和濃度差異較大，性；在擴(kuò)增效率方面，磁珠法、超聲法、試劑盒法無(wú)溶菌酶處理）比熱裂解法和超聲+熱裂解法高，其直接達(dá)到建庫(kù)的要求。序結(jié)果分析是運(yùn)用降維分析的方式，將數(shù)據(jù)之間的差異反映在兩標(biāo)軸表示出來(lái)，通過(guò) PCA 分析圖中樣品距離的遠(yuǎn)近組分的相似性，從而可以判斷多個(gè)重復(fù)樣品之間的點(diǎn)之間相隔越近，則表示樣品的物種組成越相似。知，每種提取方法中所對(duì)應(yīng)的三個(gè)重復(fù)樣均聚集在復(fù)性較好。


本文編號(hào)：3255768