發(fā)布時間：2021-06-21 08:29

　　目的獲得長爪沙鼠非酒精性脂肪性肝�。∟AFLD）模型中CDC42作用蛋白4（CIP4）基因的表達規(guī)律及是否受β連環(huán)蛋白（β-catenin）調(diào)控的證據(jù)。方法 3月齡雄性長爪沙鼠30只采用隨機數(shù)字表法分為正常組6只和模型組24只,模型組按飼喂高脂飼料的時間不同分為2周組、4周組、8周組、12周組,每組6只。按組采集肝臟大葉標本4份,HE染色及Masson染色檢測肝臟的病理變化,熒光定量PCR（q PCR）法檢測CIP4 m RNA相對表達量,蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測CIP4蛋白相對表達量,免疫共沉淀（Co IP）驗證CIP4與β-catenin的相互作用。結果肝病理學檢測結果顯示,隨著造模時間的延長,模型組沙鼠均出現(xiàn)肝臟脂肪病變（單純脂肪肝,2～4周造模,S0～S1）,脂肪性肝炎（4～8周造模,脂堆積形成肝細胞的腫脹,壞死和空泡,少量纖維化出現(xiàn),S1～S2）,肝纖維化（8～12周造模,S2～S3）,部分有假小葉形成。q PCR和Western blot結果顯示,隨著造模時間延長,CIP4 m RNA和蛋白相對表達量均下降。模型組被Co IP下來的CIP4蛋白明顯下降... 

【文章來源】：浙江醫(yī)學. 2020,42(10)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

各組沙鼠CIP4 m RNA相對表達量比較（a:CIP4基因的熔解曲線；b:CIP4基因的擴增曲線；c：內(nèi)參GAPDH的熔解曲線；d：內(nèi)參GAPDH的擴增曲線；e：各組沙鼠CIP4 m RNA相對表達量，與Z組比較，*P<0.05)

圖2 各組沙鼠CIP4 m RNA相對表達量比較（a:CIP4基因的熔解曲線；b:CIP4基因的擴增曲線；c：內(nèi)參GAPDH的熔解曲線；d：內(nèi)參GAPDH的擴增曲線；e：各組沙鼠CIP4 m RNA相對表達量，與Z組比較，*P<0.05)2.4 CIP4與β-catenin的相互作用

最新的肝纖維化相關研究進展認為促纖維化因子（TGF-β1、NF-κB、腎素、血管緊張素等）上調(diào)了細胞外基質(zhì)基因表達，同時抑纖維化因子IFN-γ致促膠原降解基因表達下降，致膠原過量堆積而致纖維化[10]，以上理論中關于CIP4的作用尚是空白。抑制不同細胞中CIP4基因后導致細胞多種分化結果，其中一種是纖維化，這說明調(diào)節(jié)該基因可以用來研究肝纖維化的發(fā)生機制。CIP4是PCH家族的一個成員，具有與磷脂酰絲氨酸結合的FER類似區(qū)和一個SH3區(qū)域。該基因的轉(zhuǎn)錄激活/抑制主要取決于其3個結構域，一個是TR-RXR/PPAR-RXR二聚體的結合區(qū)（FCH區(qū)），一個是CDC42結合的HR1區(qū)，另一個是SH3區(qū)，即富含脯氨酸，可與下游特定泛素化的靶蛋白結合[11]。腫瘤細胞實驗和腎纖維化研究表明CIP4可通過SH3區(qū)的脯氨酸與β-catenin結合，而β-catenin（第654位點酪氨酸殘基）磷酸化易被泛素化降解，鑒于β-catenin是一個經(jīng)典的信號轉(zhuǎn)導蛋白，因此可能通過與CIP4結合而對CIP4表達起調(diào)節(jié)作用[6,12]。本研究中CoIP法結果表明，M組中CIP4與β-catenin之間結合程度小于Z組，而且可能隨著肝纖維化的發(fā)展結合程度越來越小。結合該基因在其他領域[13-14]的研究進展推斷隨著NAFLD病程的進展，CIP4內(nèi)吞作用的破壞導致β-catenin出現(xiàn)核轉(zhuǎn)位，細胞極性發(fā)生變化，致使肝細胞黏附連接復合物（上皮細胞轉(zhuǎn)分化過程中的一種細胞形態(tài)）的完整性不能維持，從而促進肝細胞轉(zhuǎn)分化過程，其結果是肝實質(zhì)逐漸為肝星狀細胞取代，肝臟逐漸纖維化，這時肝臟外觀上看是從柔軟趨向硬化的過程。綜上所述，長爪沙鼠NAFLD模型中CIP4隨著造模時間的延長，呈現(xiàn)出低表達的趨勢，可能與炎癥及纖維化有關且受β-catenin的調(diào)控。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長爪沙鼠肝臟基因組DNA甲基化水平檢測[J]. 王志遠,劉月環(huán).  實驗動物與比較醫(yī)學. 2018(01)
[2]長爪沙鼠NAFLD模型的建立及其遺傳學的研究[J]. 劉月環(huán),吳舊生,應華忠,徐承富,石巧娟,余陳歡.  中國比較醫(yī)學雜志. 2017(05)

碩士論文
[1]CIP4在腎臟纖維化中的表達及其與β-catenin的關系[D]. 張亞敏.華中科技大學 2011



本文編號：3240345