研究背景和目的:嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒（SFTSV）,感染后導(dǎo)致嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征（SFTS）,死亡率較高。目前其致病機(jī)制尚不明確,臨床以對癥治療為主,藥物研發(fā)進(jìn)展緩慢。干擾素（interferon,IFN）介導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答是抵抗病原體入侵的首要防線之一。干擾素刺激基因（IFN-stimulatedgenes,ISGs）是干擾素信號通路激活后的最終效應(yīng)分子,發(fā)揮抗病毒和/或免疫調(diào)節(jié)作用,干擾素誘導(dǎo)的四肽重復(fù)蛋白3（IFIT3）就是其中之一。IFIT3在登革病毒、水泡口炎病毒等多種病毒感染中發(fā)揮著抗病毒作用;在SFTSV感染的單核細(xì)胞中IFIT3表達(dá)顯著增加。這些數(shù)據(jù)提示,IFIT3與病毒感染關(guān)系密切,但其對SFTSV的作用尚無相關(guān)報道,具體機(jī)制也有待進(jìn)一步研究。本研究的目的在于研究在體外培養(yǎng)體系中,IFIT3對SFTSV復(fù)制的影響并初步探究其作用機(jī)制。研究方法:1.通過轉(zhuǎn)染質(zhì)�；騭iRNA分別上調(diào)或下調(diào)A549細(xì)胞中IFIT3的表達(dá),real-time PCR及Western Blot等方法檢測IFIT3的表達(dá)及SFTSV復(fù)制情況;2.通過轉(zhuǎn)染質(zhì)�；騭iRNA調(diào)節(jié)A5... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、研究背景
    1.嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒
        1.1.SFTSV病原學(xué)
        1.2.SFTSV的流行病學(xué),臨床癥狀和診斷
        1.3.SFTSV的傳播途徑
        1.4.SFTSV的治療與疫苗研究
    2.干擾素信號通路與IFIT3
        2.1.干擾素信號通路
        2.2.干擾素誘導(dǎo)的四肽重復(fù)蛋白3
        2.3.SFTSV感染與固有免疫
    3.研究目的及意義
        3.1.研究目的
        3.2.研究意義
    4.技術(shù)路線圖
        4.1.IFIT3高表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.IFIT3對SFTSV及IFNβ抗病毒作用的影響
        4.3.IFIT3對JAK/STAT信號通路的影響
二、實驗材料
    1.實驗儀器、試劑與耗材
    2.菌株細(xì)胞和培養(yǎng)基
    3.常用質(zhì)粒及其載體
    4.常用熒光定量PCR引物
    5.常用試劑及配制方法
三、實驗方法
    1.細(xì)胞培養(yǎng)
    2.SFTSV感染A549細(xì)胞
    3.細(xì)胞內(nèi)總RNA的提取
    4.逆轉(zhuǎn)錄PCR
    5.熒光定量PCR
    6.干擾素α/β刺激A549細(xì)胞
    7.利用逆轉(zhuǎn)錄所得cDNA構(gòu)建IFIT3表達(dá)質(zhì)粒
    8.大提質(zhì)粒
    9.細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    10.提取細(xì)胞總蛋白
    11.BCA法測蛋白濃度
    12.蛋白質(zhì)免疫印跡
    13.雙熒光報告基因?qū)嶒?br>    14.統(tǒng)計學(xué)分析
四、實驗結(jié)果
    1.SFTSV感染細(xì)胞
    2.SFTSV感染誘導(dǎo)IFIT3表達(dá)增加
    3.高表達(dá)IFIT3抑制SFTSV復(fù)制
        3.1.在A549細(xì)胞中Ⅰ型干擾素誘導(dǎo)IFIT3表達(dá)
        3.2.成功構(gòu)建IFIT3-pcDNA3.1-3×tag高表達(dá)質(zhì)粒
        3.3.IFIT3-pcDNA3.1-3×tag質(zhì)粒在293T和A549細(xì)胞中成功表達(dá)
    4.IFIT3對SFTSV復(fù)制的影響
        4.1.高表達(dá)IFIT3質(zhì)粒可以抑制SFTSV的復(fù)制
        4.2.敲低IFIT3的表達(dá)促進(jìn)SFTSV的復(fù)制
    5.IFIT3可以調(diào)節(jié)Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
        5.1.高表達(dá)IFIT3可以促進(jìn)IFNβ的產(chǎn)生
        5.2.敲低IFIT3的表達(dá)削弱Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
    6.IFIT3調(diào)節(jié)JAK/STAT信號通路
        6.1.IFIT3調(diào)節(jié)STAT1磷酸化
        6.2.IFIT3可以調(diào)節(jié)ISRE的活性
        6.3.IFIT3調(diào)節(jié)ISGs的表達(dá)
    7.過表達(dá)IFIT3協(xié)同促進(jìn)IFNβ對SFTSV的抑制作用
        7.1.外源性Ⅰ型干擾素抑制SFTSV復(fù)制
        7.2.高表達(dá)IFIT3可以增強(qiáng)IFNβ對SFTSV的抑制作用
        7.3.高表達(dá)IFIT3可以增強(qiáng)IFNβ對ISGs的促進(jìn)作用
    8.高表達(dá)IFIT3對TLR3,RIG-Ⅰ及MDA5的影響
五、討論
六、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
文獻(xiàn)綜述 嚴(yán)重發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒（SFTSV)在輸血安全中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3180631