人柯薩奇病毒B組2型（CV-B2）作為一個引起的兒童手足口�。℉FMD）的病原體之一,流行病學(xué)研究證明CV-B2在人群中感染可能會引起重癥病例,但相關(guān)的致病機(jī)理依然處于探索階段,目前尚無針對CV-B2的有效藥物或疫苗,因此建立合適的動物模型對于深入開展基礎(chǔ)研究、疫苗研發(fā)與藥物研究具有重要意義。本論文首先對CV-B2細(xì)胞基質(zhì)及檢測方法的建立進(jìn)行摸索;之后選用與人類較為接近的非人靈長類動物（恒河猴）作為研究對象,構(gòu)建CV-B2感染的動物模型,對感染模型臨床表征、血液生化、排毒情況、組織病理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)及免疫學(xué)指標(biāo)等進(jìn)行初步研究,探索病毒與宿主之間不同層次的相互作用,為闡明病毒的感染機(jī)制、檢測方法建立、靈長類動物模型評價等提供理論依據(jù),以期為CV-B2后續(xù)開展其感染機(jī)制、疫苗研發(fā)、標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建及動物模型評價等提供數(shù)據(jù)支持。本研究第一部分建立CV-B2病毒培養(yǎng)體系及檢測方法。方法將病毒接種于Vero細(xì)胞,按不同時間點(diǎn)收集病毒感染樣品,采用微量滴定法測定病毒感染性滴度,繪制病毒感染Vero的增殖動力學(xué)曲線;用含有T7啟動子的VP1基因與T載體連接后,經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄獲得RNA標(biāo)準(zhǔn)品。利用標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 CV-B2病毒培養(yǎng)及檢測方法建立
    1. 實驗材料
        1.1 病毒
        1.2 細(xì)胞系
        1.3 主要實驗試劑和耗材
        1.4 引物
        1.5 實驗設(shè)備儀器
    2. 實驗方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 CV-B2病毒的培養(yǎng)、滴度和增殖動力學(xué)測定
        2.3 q-RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)品的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    3. 結(jié)果
        3.1 CV-B2在Vero的病變情況
        3.2 CV-B2感染Vero的增殖動力學(xué)曲線
        3.3 q-RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線
    4. 討論
        4.1 CV-B2病毒生長曲線
        4.2 CV-B2核酸檢測方法
    5 小結(jié)
第二部分 CV-B2恒河猴嬰猴感染模型的構(gòu)建
    1. 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要實驗試劑及耗材
        1.3 引物
        1.4 實驗設(shè)備儀器
    2. 實驗方法
        2.1 動物編號
        2.2 動物感染劑量及方式
        2.3 實驗觀察及體溫監(jiān)測
        2.4 樣品采集及處理
        2.5 血細(xì)胞及生化檢測
        2.6 樣品病毒核酸檢測
        2.7 病理檢查
        2.8 免疫學(xué)研究
        2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
    3. 結(jié)果
        3.1 CV-B2感染恒河猴的臨床癥狀
        3.2 CV-B2感染恒河猴的體溫監(jiān)測
        3.3 CV-B2感染恒河猴的血細(xì)胞變化
        3.4 CV-B2感染恒河猴的生化指標(biāo)變化
        3.5 CV-B2感染恒河猴的樣品病毒核酸檢測
        3.6 CV-B2感染恒河猴的組織病理分析
        3.7 CV-B2感染恒河猴的免疫學(xué)指標(biāo)變化
    4. 討論
        4.1 臨床癥狀
        4.2 糞便、咽拭子、血液、組織中的病毒載量
        4.3 組織浸染和病理改變
        4.4 免疫反應(yīng)
    5. 小結(jié)
    6. 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄一 主要縮略詞表
    附錄二 主要溶液的和培養(yǎng)基的配置
    附錄三 流式細(xì)胞亞群分析
    附錄四 組織實驗結(jié)果統(tǒng)計
研究生簡歷
研究生在讀期間發(fā)表論文（含并列第一作者）
致謝



本文編號：3151326