N 6 -methyladenosine調(diào)控腸病毒71型的復(fù)制
發(fā)布時(shí)間：2021-04-14 02:30
N6-methyladenosine（m6A）是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的可逆的RNA修飾,也是分布最廣泛的RNA修飾,在RNA的代謝及功能中發(fā)揮重要作用。早在40年前已發(fā)現(xiàn)病毒RNA含有m6A修飾,但由于技術(shù)和知識(shí)的限制,病毒m6A的功能并不清楚。直到最近才有報(bào)道稱m6A修飾存在于艾滋病病毒、流感病毒、黃病毒等病毒的RNA并調(diào)控病毒的感染與復(fù)制。目前關(guān)于病毒m6A修飾及其功能的研究較少且分子機(jī)制不清楚,病毒m6A的研究在未來(lái)一段時(shí)間仍將是病毒表觀遺傳學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。為研究EV71 RNA m6A修飾的功能,我們首先使用UHPLC、MeRIP-Northern Blot和MeRIP-Seq等方法證明EV71基因組RNA的VP、2C和3D等蛋白編碼區(qū)含有m6A修飾。使用Western Blot檢測(cè),我們發(fā)現(xiàn)EV71感染導(dǎo)致宿主m6A修飾甲基化酶和結(jié)合蛋白表達(dá)增加而去甲基化酶表達(dá)降...
【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所)湖北省
【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
mRNA化學(xué)修飾的結(jié)構(gòu)
第 1 章 引言“Erasers”蛋白去除，而“Readers”蛋白可與其發(fā)生直接相互作用并調(diào)節(jié)多種生理過(guò)程（圖1.2）。圖 1.2 可逆的 m6A 修飾的機(jī)制RNA m6A 修飾由 METTL3、METTL14、WTAP 及一些輔助因子組成的甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體加工產(chǎn)生，可被 FTO 和 ALKBH5 兩種去甲基化酶去除。YTH 蛋白、HNRNP 及其他一些蛋白可識(shí)別 m6A 修飾并行使多種生物功能。Figure 1.2 Reversible m6A machineryRNA m6A is catalyzed by a methyltransferase complex consisting of METTL3, METTL14,WTAP, and other factors, and is removed by FTO and ALKBH5. YTH proteins, HNRNP andother proteins bind to m6A sites and play critical roles in various biological processes.1.1.2.1 m6A 修飾的“Writers”甲基轉(zhuǎn)移酶的發(fā)現(xiàn)為 m6A 功能的研究提供了基礎(chǔ)。早期的研究發(fā)現(xiàn)兩個(gè)蛋白復(fù)合物（MT-A 和 MT-B）對(duì) mRNA m6A 的形成至關(guān)重要(26)。之后，從 MT-A中篩選出的關(guān)鍵分子 methyltransferase like 3（METTL3，也稱為 MTA-70）能夠結(jié)合 S-腺苷甲硫氨酸，被證明是甲基轉(zhuǎn)移酶的一部分（圖 1.3）(27)。通過(guò)分析METTL3 的同源蛋白發(fā)現(xiàn)：methyltransferase like 14（METTL14）與 METTL3有高度同源性，并和 m6A 的形成密切相關(guān)，因此 METTL14 被認(rèn)為是 m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的另一個(gè)成員（圖 1.3）(28)。雖然 METTL14 與 METTL3 高度同源，但不能像 METTL3 一樣催化甲基轉(zhuǎn)移。盡管如此
圖 1.3 人類 m6A writers 和 erasers 的蛋白結(jié)構(gòu)域METTL3、METTL14 和 WTAP 是甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的組成成分。METTL3 和 METT具有 m6A 甲基化所需的 SAM 結(jié)合結(jié)構(gòu)域，而 WTAP 不包含特征性結(jié)構(gòu)域。Eraser 蛋白中，F(xiàn)TO 和 ALKBH5 具有共同的 AlkB 結(jié)構(gòu)域。 與 ALKBH5 相比，F(xiàn)TO 具有 C 端結(jié)構(gòu)域(43)。Figure 1.3 Domain structures of writer and eraser proteins in humanMETTL3, METTL14, and WTAP are components of the methyltransferase complex.METTL3 and METTL4 have a SAM-binding domain required for m6A methylation, whereWTAP contains no characteristic domain. Eraser proteins, FTO and ALKBH5 demethylasehave an AlkB domain in common. Compared to ALKBH5, FTO has an additional C-termindomain (43).1.1.2.3 m6A 修飾的“Readers”m6A 參與 RNA 代謝的各個(gè)過(guò)程，其功能的發(fā)揮主要通過(guò)招募 m6A 結(jié)合蛋來(lái)實(shí)現(xiàn)。通過(guò) RNA pull down 實(shí)驗(yàn)結(jié)合質(zhì)譜分析，目前已鑒定出一些 m6A 結(jié)合
本文編號(hào)：3136478
【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所)湖北省
【文章頁(yè)數(shù)】：121 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
mRNA化學(xué)修飾的結(jié)構(gòu)
第 1 章 引言“Erasers”蛋白去除，而“Readers”蛋白可與其發(fā)生直接相互作用并調(diào)節(jié)多種生理過(guò)程（圖1.2）。圖 1.2 可逆的 m6A 修飾的機(jī)制RNA m6A 修飾由 METTL3、METTL14、WTAP 及一些輔助因子組成的甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體加工產(chǎn)生，可被 FTO 和 ALKBH5 兩種去甲基化酶去除。YTH 蛋白、HNRNP 及其他一些蛋白可識(shí)別 m6A 修飾并行使多種生物功能。Figure 1.2 Reversible m6A machineryRNA m6A is catalyzed by a methyltransferase complex consisting of METTL3, METTL14,WTAP, and other factors, and is removed by FTO and ALKBH5. YTH proteins, HNRNP andother proteins bind to m6A sites and play critical roles in various biological processes.1.1.2.1 m6A 修飾的“Writers”甲基轉(zhuǎn)移酶的發(fā)現(xiàn)為 m6A 功能的研究提供了基礎(chǔ)。早期的研究發(fā)現(xiàn)兩個(gè)蛋白復(fù)合物（MT-A 和 MT-B）對(duì) mRNA m6A 的形成至關(guān)重要(26)。之后，從 MT-A中篩選出的關(guān)鍵分子 methyltransferase like 3（METTL3，也稱為 MTA-70）能夠結(jié)合 S-腺苷甲硫氨酸，被證明是甲基轉(zhuǎn)移酶的一部分（圖 1.3）(27)。通過(guò)分析METTL3 的同源蛋白發(fā)現(xiàn)：methyltransferase like 14（METTL14）與 METTL3有高度同源性，并和 m6A 的形成密切相關(guān)，因此 METTL14 被認(rèn)為是 m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的另一個(gè)成員（圖 1.3）(28)。雖然 METTL14 與 METTL3 高度同源，但不能像 METTL3 一樣催化甲基轉(zhuǎn)移。盡管如此
圖 1.3 人類 m6A writers 和 erasers 的蛋白結(jié)構(gòu)域METTL3、METTL14 和 WTAP 是甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的組成成分。METTL3 和 METT具有 m6A 甲基化所需的 SAM 結(jié)合結(jié)構(gòu)域，而 WTAP 不包含特征性結(jié)構(gòu)域。Eraser 蛋白中，F(xiàn)TO 和 ALKBH5 具有共同的 AlkB 結(jié)構(gòu)域。 與 ALKBH5 相比，F(xiàn)TO 具有 C 端結(jié)構(gòu)域(43)。Figure 1.3 Domain structures of writer and eraser proteins in humanMETTL3, METTL14, and WTAP are components of the methyltransferase complex.METTL3 and METTL4 have a SAM-binding domain required for m6A methylation, whereWTAP contains no characteristic domain. Eraser proteins, FTO and ALKBH5 demethylasehave an AlkB domain in common. Compared to ALKBH5, FTO has an additional C-termindomain (43).1.1.2.3 m6A 修飾的“Readers”m6A 參與 RNA 代謝的各個(gè)過(guò)程，其功能的發(fā)揮主要通過(guò)招募 m6A 結(jié)合蛋來(lái)實(shí)現(xiàn)。通過(guò) RNA pull down 實(shí)驗(yàn)結(jié)合質(zhì)譜分析，目前已鑒定出一些 m6A 結(jié)合
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