目的分離純化旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)分泌的外泌體,并進(jìn)行鑒定,為研究旋毛蟲(chóng)免疫逃逸機(jī)制提供新的線索。方法采用超速離心法提取旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體,通過(guò)透射電子顯微鏡、納米顆粒跟蹤分析、免疫印記和小RNA測(cè)序?qū)ζ溥M(jìn)行鑒定。結(jié)果旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體為有膜的泡狀物,直徑約80～200 nm,表達(dá)外泌體特異性標(biāo)記蛋白CD63和Enolase,含1 266個(gè)已知的miRNA。結(jié)論經(jīng)形態(tài)、粒徑及標(biāo)記蛋白分析證實(shí)成功分離旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體,同時(shí)構(gòu)建旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體的小RNA文庫(kù),鑒定出多種功能性小RNA,為深入研究旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體內(nèi)小RNA分子的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

透射電子顯微鏡觀察旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體的形態(tài)特征

表1 旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體不同大小的百分比Tab.1 Percentage of T. spiralis muscle larvae EXO in various size range Particle size/nm number % 0-80 0 80-200 83 200-300 12 300-500 5 500-1000 02.3 旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體的小RNA分析

將所有ML-EXO中的小RNA與各類RNA的比對(duì)、注釋情況進(jìn)行總結(jié)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在ML-EXO小RNA文庫(kù)中,來(lái)源于編碼蛋白質(zhì)的內(nèi)含子和外顯子共6 764種,約占小RNA的0.55%,表明總RNA質(zhì)量完好,基本沒(méi)有降解。各類非編碼小RNA共206 120種,占小RNA的16.64%,其中rRNA的比例最高,占12.80%。未注釋的小RNA共959 200種,占小RNA的77.45%,這部分序列可能是新小RNA序列,其分類和功能值得進(jìn)一步研究(圖3A)。通過(guò)將小RNA和miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),鑒定出已知miRNA共66 352種,占小RNA的5.36%。對(duì)已知miRNA用多個(gè)軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)靶基因數(shù)量為34 437個(gè)(表2)。為了確定預(yù)測(cè)的靶基因行使的主要生物學(xué)功能,本研究通過(guò)GO富集分析靶基因的功能分類體系,發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞、生物學(xué)調(diào)節(jié)、代謝等過(guò)程中,靶基因顯著富集(圖3B)。進(jìn)一步利用ggplot2對(duì)豐度前50的miRNA的靶基因進(jìn)行功能預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)其參與了多種免疫調(diào)節(jié)如MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)、JNK級(jí)聯(lián)反應(yīng)和B細(xì)胞活化等過(guò)程(圖3C)。表2 旋毛蟲(chóng)肌幼蟲(chóng)期外泌體中的miRNA靶基因預(yù)測(cè)統(tǒng)計(jì)Tab.2 Summary of T. spiralis muscle larvae EXO miRNA target prediction software miRNA number Target gene number Count of miRNA::corresponding target gene Target location number targetscan 1279 34859 3662318 4265265 miRanda 1270 34510 2578906 3055763 Result 1266 34437 986331 —

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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