【目的】通過對布魯氏菌gntR基因進行原核表達,分析其誘導(dǎo)機體產(chǎn)生的Th1和Th2型免疫反應(yīng)�！痉椒ā恳圆剪斒暇鶶2308基因組為模板,根據(jù)GenBank上公布的S2308 gntR基因序列設(shè)計引物,利用分子克隆技術(shù),將gntR基因片段克隆至原核表達載體pET-30a,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞中,誘導(dǎo)GntR蛋白表達;利用SDS-PAGE對GntR重組蛋白（rGntR）進行分析;利用AKTAxpress智能多維純化系統(tǒng)對rGntR進行純化;利用Western blotting分析其免疫反應(yīng)性;用rGntR刺激小鼠巨噬細胞RAW 264.7和小鼠脾細胞,利用ELISA試劑盒檢測細胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5,以及IgG抗體的水平。將rGntR免疫小鼠,檢測小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平�！窘Y(jié)果】gntR基因大小為735 bp,編碼245個氨基酸,大約在35 kDa處出現(xiàn)蛋白條帶,純化后為單一條帶。WB顯示,rGntR具有較好的免疫反應(yīng)性。rGntR可誘導(dǎo)宿主細胞和小鼠產(chǎn)生較高水平的IFN-γ、IL-4和IgG�！窘Y(jié)論】rGntR可在體內(nèi)或體外誘導(dǎo)輔助性T細... 

【文章來源】：微生物學(xué)報. 2020,60(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

rGntR的表達、純化與Western blotting分析

rGntR刺激RAW 264.7細胞后IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5的水平檢測

為了檢測rGntR誘導(dǎo)的細胞免疫反應(yīng)，用rGntR免疫BALB/c小鼠后35 d，無菌分離脾細胞，檢測脾細胞中Th1型細胞因子IFN-γ和Th2型細胞因子IL-4的水平。免疫小鼠的脾細胞用S2308裂解物、Con A(陽性對照)或RPMI 1640(陰性對照)進行刺激。當用熱滅活S2308刺激時，免疫rGntR小鼠脾細胞產(chǎn)生IFN-γ和IL-4的水平顯著高于免疫PBS的小鼠(P<0.01)(圖4)；在所有組中，ConA刺激小鼠脾細胞后，均可產(chǎn)生較高水平的IFN-γ和IL-4；而RPMI 1640刺激的小鼠脾細胞沒有細胞因子產(chǎn)生，并且免疫PBS小鼠的脾細胞產(chǎn)生較低水平的細胞因子(圖4)，表明小鼠免疫rGntR后，可誘導(dǎo)Th1和Th2型細胞免疫反應(yīng)。圖4.rGntR免疫小鼠后小鼠脾細胞中IFN-γ和IL-4的水平檢測

【參考文獻】：
期刊論文
[1]布魯氏菌L7/L12蛋白的基因克隆與原核表達[J]. 胡祥坤,盧天成,王巖,劉思陽,王秀然.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2019(07)
[2]羊種布氏桿菌M5-90 DnaK的原核表達及免疫保護性研究[J]. 張俊波,印雙紅,易繼海,張紅,方維煥,王嘉福,李志強,陳創(chuàng)夫.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2018(08)



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