目的:旨在探索Ⅰ型日本乙型腦炎病毒傳代致弱后基因組突變NS2A-C60A對乙腦病毒生物學(xué)特性的影響。方法:首先通過對傳代致弱及原始乙腦毒株基因組序列進(jìn)行測序比對、結(jié)構(gòu)預(yù)測分析并利用Western blotting（WB）確定了目標(biāo)研究位點(diǎn)NS2A-C60A;然后使用反向遺傳定點(diǎn)突變技術(shù)構(gòu)建拯救了包含NS2A-C60A單點(diǎn)突變的病毒株;最后利用噬斑形態(tài)觀察、生長曲線、雙螢光素酶分析,WB以及炎性因子檢測和動物實(shí)驗(yàn)研究了該單點(diǎn)突變對于乙腦病毒生物學(xué)特性的影響。結(jié)果:首次研究發(fā)現(xiàn)Ⅰ型乙腦病毒傳代致弱會導(dǎo)致NS1’蛋白表達(dá)的顯著下降以及可能的相關(guān)位點(diǎn)NS2A-C60A,并成功拯救獲得了NS2A-C60A單點(diǎn)突變毒株r JEV-C60A,研究發(fā)現(xiàn)NS2AC60A突變對乙腦病毒的生長特性及噬斑形成沒有顯著影響,但是能夠顯著降低乙腦病毒NS1’蛋白的表達(dá),并且該位點(diǎn)突變能夠輕微阻礙乙腦病毒對細(xì)胞炎性因子表達(dá)的抑制,動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NS2A-C60A點(diǎn)突變病毒與原毒株具有相似的神經(jīng)毒力,說明該位點(diǎn)突變不是影響乙腦病毒毒力致弱的關(guān)鍵位點(diǎn)。結(jié)論:新發(fā)現(xiàn)的NS2A-C60A位點(diǎn)突變能夠顯著減少乙腦病毒NS1... 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

確定目標(biāo)研究位點(diǎn)NS2A-C60A結(jié)果圖

細(xì)胞病變觀察以及PCR測序鑒定結(jié)果證實(shí)我們成功拯救獲得了NS2A-C60A單點(diǎn)突變乙腦病毒，將其命名為r JEV-C60A。2.3 r JEV-C60A點(diǎn)突變病毒相關(guān)生物學(xué)特征研究

(1)雙螢光素酶分析結(jié)果。雙螢光素酶分析結(jié)果顯示NS2A-C60A點(diǎn)突變會導(dǎo)致較低的雙螢光素酶活性，暗示該點(diǎn)突變會顯著降低NS1"蛋白的表達(dá)水平(圖5)。圖4 原始毒株r JEV-WT與單點(diǎn)突變毒株r JEV-C60A的生長曲線檢測結(jié)果圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蝙蝠作為流行性乙型腦炎病毒宿主的研究[J]. 張海林,張?jiān)浦?黃文麗,米竹青,龔鶴琴,楊衛(wèi)紅,施華芳,自登云,李兆祥,王靜林,章域震,龔正達(dá),袁慶虹,馮錫光.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2002(05)
[2]云南省乙型腦炎病毒宿主和媒介研究[J]. 張海林,自登云,龔正達(dá).  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2000(02)



本文編號：3116994