發(fā)布時(shí)間：2021-03-29 04:23

　　第一部分hnRNPU蛋白在睪丸中的表達(dá)與定位研究【目的】研究hnRNPU蛋白在物種之間的保守性,并探討其在人和小鼠睪丸中的表達(dá)水平以及細(xì)胞定位模式�！痉椒ā坷蒙镄畔W(xué)分析、免疫熒光、免疫組化、RT-q PCR、Western blot等方法對(duì)hnRNPU的氨基酸序列在人、獼猴、牛、狗、大鼠、小鼠等物種中的保守性進(jìn)行分析,并研究hnRNPU在人和小鼠睪丸中的表達(dá)及定位。【結(jié)果】hnRNPU蛋白氨基酸序列在人和小鼠中的保守性高達(dá)97.25%,hnRNPU蛋白在人和小鼠睪丸中高度表達(dá),且主要在睪丸生殖細(xì)胞和支持細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá)。【結(jié)論】hnRNPU在哺乳動(dòng)物中高度保守,且定位在睪丸生殖細(xì)胞和支持細(xì)胞的細(xì)胞核中。第二部分生殖細(xì)胞中hnRNPU對(duì)小鼠精子發(fā)生和生育能力影響的研究【目的】研究生殖細(xì)胞中的hnRNPU對(duì)小鼠精子發(fā)生和生育能力調(diào)控的作用�！痉椒ā坷肅re-Loxp系統(tǒng)構(gòu)建生殖細(xì)胞條件性敲除Hnrnpu基因的小鼠模型,通過(guò)生育率測(cè)試、睪丸形態(tài)學(xué)分析等方法以解析hnRNPU在精子發(fā)生和雄性生育力中的作用及功能。【結(jié)果】成功構(gòu)建了Stra8-Cre介導(dǎo)的生殖細(xì)胞條件性敲除hnRNPU... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

hnRNPU蛋白進(jìn)化保守性分析和在小鼠不同組織中的表達(dá)圖

圖 2：hnRNPU 在小鼠生殖細(xì)胞和支持細(xì)胞中的表達(dá)及定位圖。圖 2A：免疫組織化學(xué)分析 hnRNPU 蛋白在小鼠睪丸中的表達(dá)定位。棕色代表 hnRNPU蛋白的表達(dá)，Sc 代表支持細(xì)胞，Spc 代表精母細(xì)胞，標(biāo)尺=100μm。圖 2B：生殖細(xì)胞的標(biāo)志物 DDX4（綠色）和 hnRNPU（紅色）在成年野生型小鼠睪丸中的雙重標(biāo)記熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果，標(biāo)尺=100μm。圖 2C：支持細(xì)胞的標(biāo)志物 WT1（紅色）和 hnRNPU（綠色）在成年野生型小鼠睪丸

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文3.3 hnRNPU 蛋白在人睪丸的生精細(xì)胞和支持細(xì)胞中同樣表達(dá)鑒于 hnRNPU 蛋白在進(jìn)化中高度保守性，并且在人和小鼠中的同源性高達(dá) 97.25（圖 1A 和 B）。為更加明確 hnRNPU 蛋白對(duì)人的睪丸同樣具有重要作用，我們?cè)诘牟G丸組織中對(duì) hnRNPU 蛋白做了進(jìn)一步表達(dá)驗(yàn)證分析。我們收集了因“前列腺癌睪丸切除患者的睪丸組織進(jìn)行了 Western Blot 實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 hnRNPU 蛋白在的睪丸中同樣表達(dá)（圖 3A）。另外，我們利用免疫熒光共染技術(shù)（利用生殖細(xì)胞記物 DDX4、支持細(xì)胞標(biāo)記物 WT1 分別與 hnRNPU 進(jìn)行共染）對(duì) hnRNPU 蛋白在胎兒期睪丸（24 周）中進(jìn)行了定位分析，結(jié)果顯示 hnRNPU 蛋白同樣定位在人睪生殖細(xì)胞和支持細(xì)胞的細(xì)胞核中（圖 3B 和 C）。這部分結(jié)果提示 hnRNP U 蛋白在睪丸中的表達(dá)定位模式與在小鼠睪丸中相類(lèi)似，進(jìn)一步表明該蛋白可能會(huì)參與調(diào)控類(lèi)精子發(fā)生。


本文編號(hào)：3106891