目的:從腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）/酪氨酸激酶受體B（TrkB）信號通路研究烏頭湯對神經(jīng)病理性疼痛模型小鼠的神經(jīng)元保護作用。方法:40只雄性ICR小鼠隨機分為假手術(shù)組（Sham）,SNL模型組,烏頭湯組(126 mg·kg^-1),ANA-12+烏頭湯組。建立神經(jīng)病理性疼痛L5脊神經(jīng)結(jié)扎（SNL）小鼠模型,造模成功后,灌胃給藥10 d,腦立體定位注射BDNF/TrkB受體拮抗劑ANA-12(50 nmol·L^-1)7 d,免疫組化法檢測小鼠海馬BDNF,蛋白激酶B（Akt）,環(huán)磷酸腺苷（c AMP）反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）蛋白的表達。免疫熒光法觀察谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）神經(jīng)元變化。小鼠海馬神經(jīng)元細胞分離于精準孕18 d的胎鼠腦組織,分為正常組、甘氨酸處理組,ANA-12組(0.5 mmol·L^-1),ANA-12+甘氨酸組,ANA-12+烏頭湯組,ANA-12+烏頭湯+甘氨酸組,細胞免疫熒光法觀察原代神經(jīng)元形態(tài)學變化;海馬神經(jīng)元細胞分為正常組、甘氨酸處理組(200 mmol·L^-1

【文章來源】：中國實驗方劑學雜志. 2020,26(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

烏頭湯對小鼠海馬BDNF/Trk B通路中BDNF,CREB,Akt陽性細胞數(shù)的影響(免疫組化，×400)

與正常組比較，甘氨酸處理組谷氨酸能神經(jīng)元的總樹突棘、粗短狀樹突棘、細小狀樹突棘和蘑菇狀樹突棘的數(shù)量均顯著增高，甘氨酸可誘導谷氨酸能神經(jīng)元的激活(P<0.01);與甘氨酸處理組比較，ANA-12組，ANA-12+甘氨酸組，ANA-12+烏頭湯組和ANA-12+烏頭湯+甘氨酸組中谷氨酸能神經(jīng)元的總樹突棘、粗短狀樹突棘、細小狀樹突棘和蘑菇狀樹突棘的數(shù)量均明顯下降(P<0.05,P<0.01)。見圖3，表3。3.3對小鼠海馬谷氨酸-氨基丁酸能神經(jīng)元平衡的影響

本實驗構(gòu)建NP經(jīng)典模型SNL和海馬定位注射ANA-12，通過正、反方向來明確BDNF/Trk B通路對烏頭湯聯(lián)治療作用的影響。結(jié)果顯示，在SNL小鼠中BDNF,Akt及CREB的表達量較假手術(shù)組均顯著降低，烏頭湯對上述分子的表達量均有顯著地改善，而海馬定位注射ANA-12后僅有CREB的表達量受到顯著抑制，而Akt的表達量未受到顯著影響。海馬內(nèi)谷氨酸和氨基丁酸能神經(jīng)元的平衡對維持機體的平衡至關(guān)重要[17-18]，通過免疫熒光，觀察海馬內(nèi)谷氨酸、氨基丁酸能神經(jīng)元修復的比例。結(jié)果顯示，烏頭湯聯(lián)可緩解SNL小鼠中谷氨酸-氨基丁酸能神經(jīng)元的失衡，拮抗BDNF/Trk B通路后烏頭湯聯(lián)失去了調(diào)控作用。以上結(jié)果表明，烏頭湯聯(lián)可通過調(diào)控BDNF/Trk B-CREB通路來調(diào)節(jié)谷氨酸-氨基丁酸能神經(jīng)元的失衡，從而達到NP的治療效果。在體外培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元，通過統(tǒng)計在突觸信號傳遞中發(fā)揮重要作用的PSD95[19]表達量和樹突棘[20-21]的數(shù)量，探究BDNF/Trk B通路在烏頭湯聯(lián)對小鼠海馬原代神經(jīng)元興奮性和可塑性的影響。課題組前期研究顯示，SNL小鼠海馬區(qū)中過度激活的小膠質(zhì)細胞會持續(xù)釋放TNF-α，從而造成神經(jīng)元的興奮性損傷，而烏頭湯對TNF-α直接誘導的神經(jīng)損傷具有良好的緩解效果[11]。本研究通過細胞給TNF-α來構(gòu)建細胞模型，顯示烏頭湯聯(lián)可通過激活甘氨酸增加PSD95在初、次級神經(jīng)元的表達量和增多樹突棘數(shù)量，而轉(zhuǎn)染BDNF-siRNA質(zhì)粒，CREB-siRNA質(zhì)粒后和ANA-12給藥后，烏頭湯聯(lián)失去了對PSD95和樹突棘的調(diào)控作用。表明烏頭湯聯(lián)可通過對BDNF/Trk B-CREB通路的調(diào)控來緩解原代神經(jīng)元興奮性及可塑性損傷，促進神經(jīng)修復。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]烏頭湯調(diào)控海馬BDNF/Trk B通路以緩解神經(jīng)病理性疼痛的痛共情緒癥狀[J]. 吳紅艷,師鈺琪,朱春燕,林娜.  中國實驗方劑學雜志. 2020(01)

碩士論文
[1]烏頭湯治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的藥效學及作用機理研究[D]. 陳少珍.廣州中醫(yī)藥大學 2006



本文編號：3090133