帕金森病是世界上第二大神經退行性疾病,其特征是黑質致密部的多巴胺能神經元選擇性地的缺失及胞漿內出現嗜酸性的Lewy小體,臨床表現為動作緩慢、手腳和身體其他部分震顫、身體僵硬、姿勢不穩(wěn)等運動障礙。隨著人類基因組學研究的深入,若干帕金森病的致病基因被發(fā)現,其中LRRK2（the leucine-rich repeat kinase 2）較為特殊,因為不管是在家族性的帕金森病,還是在散發(fā)型的帕金森病中,LRRK2（the leucine-rich repeat kinase 2）為重要存在的致病基因,使得LRRK2基因成為帕金森病模型的一個重要靶向位點。我們之前利用Morpolino抑制了LRRK2在斑馬魚內的表達,建立了帕金森病模型,模型表現出多巴胺能神經元的缺失和活動減退。但是由于Morpholino抑制效果的暫時性,不能用于大規(guī)模藥物篩選,我們利用鋅指核酶技術（zinc-finger nucleases,ZFNs）在斑馬魚中進行了LRRK2的敲除,但是結果顯示突變系表示出了行為活躍。通過RNA-seq,我們發(fā)現涉及神經疾病和免疫疾病的基因受到顯著的影響。因此,通過抗菌反應實驗進行功能性... 

【文章來源】：杭州師范大學浙江省

【文章頁數】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
1.引言
    1.1 帕金森病概述
        1.1.1 帕金森病的病理學特征
        1.1.2 帕金森病的致病機理
        1.1.3 帕金森病的臨床診斷
        1.1.4 帕金森病的治療方法：
    1.2 LRRK2 基因概述
        1.2.1 LRRK2 基因的結構及表達
        1.2.2 LRRK2 基因的致病機理
        1.2.3 LRRK2 基因和免疫細胞相關
    1.3 斑馬魚生物模式概述
        1.3.1 斑馬魚研究進展
        1.3.2 斑馬魚的人類疾病模型研究
2.實驗目的和流程
    2.1 實驗目的
    2.2 實驗流程圖
3.實驗材料和方法
    3.1 實驗動物的飼養(yǎng)及胚胎收集
        3.1.1 ZFN合成和突變體系產生
        3.1.2 實驗動物胚胎收集
    3.2 實驗試劑與儀器：
        3.2.1 基因型鑒定試劑和配方
        3.2.2 行為學分析和配方
        3.2.3 尾靜脈注射試劑
        3.2.4 激光共聚焦顯微鏡觀察神經元實驗試劑和配方
        3.2.5 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 斑馬魚的基因型鑒定
        3.3.2 斑馬魚突變體的行為學分析
        3.3.3 RNA-seq文庫的制備和分析
        3.3.4 斑馬魚中的海分枝桿菌（Mm）的尾靜脈注射感染
        3.3.5 評估個體感染步驟
4.實驗結果
    4.1 基因型鑒定結果
    4.2 LRRK2的WD40 結構域內的編碼（氨基酸）移碼突變導致斑馬魚的過度活躍
    4.3 RNA測序（RNA-seq）結果分析
    4.4 突變體中的抗菌反應
5.結果與討論
參考文獻
作者簡歷



本文編號：3087387