目的分析斯氏按蚊肽聚糖識(shí)別蛋白PGRP-LB的序列,表達(dá)和純化PGRP-LB蛋白。方法采用生物信息學(xué)方法分析PGRP-LB蛋白的序列。以斯氏按蚊的cDNA為模板PCR擴(kuò)增PGRP-LB,采用無(wú)縫克隆的方法將其克隆到原核表達(dá)載體pET28a中,然后轉(zhuǎn)化入大腸埃希菌E.coli BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞,利用異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）進(jìn)行目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE凝膠電泳及考馬斯亮藍(lán)染色檢測(cè)PGRP-LB的表達(dá)情況。經(jīng)鎳離子親和層析純化后,Bradford法檢測(cè)洗脫液的濃度。通過(guò)MEGA7軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),進(jìn)行PGRP-LB的進(jìn)化分析。結(jié)果成功獲得pET28a-PGRP-LB的重組質(zhì)粒,37℃、0.5mmol/L的IPTG能誘導(dǎo)出大量的包涵體PGRP-LB重組蛋白,相對(duì)分子質(zhì)量約為26×103,純化后的蛋白濃度為0.5mg/ml。進(jìn)化分析顯示,斯氏按蚊PGRP-LB與同科物種間親緣關(guān)系較近。結(jié)論成功使用大腸埃希菌原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)斯氏按蚊PGRP-LB蛋白,為該蛋白在按蚊體內(nèi)的定位及功能研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2020,15(05)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

斯氏按蚊和其他昆蟲(chóng)的肽聚糖識(shí)別蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

斯氏按蚊PGRP-LB氨基酸序列比對(duì)

斯氏按蚊PGRP-LB基因擴(kuò)增

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3083035