課題組前期發(fā)現(xiàn),大腸桿菌麥芽糖結合蛋白（maltose binding protein,MBP）具有免疫增強作用,尤其是當MBP與卡介苗（BCG）聯(lián)合免疫小鼠后,能夠協(xié)同促進Th1活化。進一步研究發(fā)現(xiàn),MBP可通過TLR2和TLR4信號誘導巨噬細胞向著M1型分化;通過TLR2/TLR4/TLR9 cross-talk直接誘導CD4⁺T細胞向Th1活化。樹突狀細胞（Dendritic cell,DC）作為體內(nèi)提呈功能最強大的抗原提呈細胞,在固有免疫應答和適應性免疫應答過程中發(fā)揮著舉足輕重的作用。然而,MBP聯(lián)合BCG對DC細胞的活化、成熟的影響并不清楚,以及通過DC細胞對CD4⁺T細胞的極化方向,尚未進行探討。本研究為了探討MBP聯(lián)合BCG是否影響DC的成熟,免疫磁珠分選獲取純的DC細胞,流式細胞術檢測DC細胞CD80、CD86和MHC-II分子的表達。結果顯示,MBP聯(lián)合BCG協(xié)同上調(diào)DC細胞表面共刺激分子CD80、CD86及MHC-II分子的表達,增加IL-12p70分泌水平,誘導DC細胞成熟、活化。為了探討MBP聯(lián)合BCG刺激能否通過DC... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 MBP增強免疫應答的機制研究進展
    1.2 BCG激活免疫細胞的機制與TLR有關
    1.3 Toll樣受體
        1.3.1 TLRs成員的分布與定位
        1.3.2 TLRs成員的配體和激動劑
        1.3.3 TLRs和DC
    1.4 本課題設計思路及主要研究內(nèi)容
        1.4.1 本課題的設計思路
        1.4.2 本課題研究的具體內(nèi)容
        1.4.3 本課題的特色
第2章 MBP聯(lián)合BCG體外誘導樹突狀細胞的成熟促進TH1細胞活化
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 主要實驗儀器
    2.2 主要實驗方法
        2.2.1 MBP的分離純化
        2.2.2 實驗體系建立
        2.2.3 流式細胞術檢測DC細胞CD80、CD86和MHC-II分子表達
        2.2.4 ELISA實驗檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-12p70的分泌
+T細胞的共培養(yǎng)及增殖檢測">        2.2.5 DC細胞與CD4⁺T細胞的共培養(yǎng)及增殖檢測
+T與DC共培養(yǎng)的IFN-γ和IL-4 分泌">        2.2.6 ELISPOT檢測CD4⁺T與DC共培養(yǎng)的IFN-γ和IL-4 分泌
        2.2.7 統(tǒng)計學處理
    2.3 實驗結果
        2.3.1 DC細胞的純度鑒定
+T細胞的純度鑒定">        2.3.2 CD4⁺T細胞的純度鑒定
        2.3.3 MBP聯(lián)合BCG促進DC共刺激分子和MHC-II分子的表達
        2.3.4 MBP聯(lián)合BCG促進DC分泌IL-12
        2.3.5 MBP聯(lián)合BCG對DC誘導Th1活化的影響
    2.4 討論
    2.5 小結
第3章 MBP聯(lián)合BCG誘導樹突狀細胞成熟促進TH1細胞活化的機制分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 主要試劑的配制
        3.1.4 主要實驗儀器
    3.2 主要實驗方法
-/-、TLR4^-/-小鼠TLR2/TLR4的表達鑒定">        3.2.1 RT-PCR實驗對TLR2^-/-、TLR4^-/-小鼠TLR2/TLR4的表達鑒定
        3.2.2 小鼠脾臟DC細胞的分離與培養(yǎng)
+T細胞的分離與培養(yǎng)">        3.2.3 小鼠脾臟CD4⁺T細胞的分離與培養(yǎng)
        3.2.4 流式細胞術檢測TLR2和TLR4表達
-/-、TLR4^-/-DC細胞CD80、CD86和MHC-II分子表達">        3.2.5 流式細胞術檢測TLR2^-/-、TLR4^-/-DC細胞CD80、CD86和MHC-II分子表達
        3.2.6 ELISA實驗檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-12p70的分泌
+T細胞的共培養(yǎng)及增殖檢測">        3.2.7 不同小鼠來源的DC細胞與CD4⁺T細胞的共培養(yǎng)及增殖檢測
        3.2.8 ELISPOT檢測CD4+ T與DC共培養(yǎng)的IFN-γ和IL-4 分泌
        3.2.9 ELISA實驗檢測細胞培養(yǎng)上清中IL-10 的分泌
        3.2.10 統(tǒng)計學處理
    3.3 實驗結果
-/-小鼠或TLR4^-/-小鼠脾臟單個核細胞TLR2/TLR4表達的鑒定">        3.3.1 TLR2^-/-小鼠或TLR4^-/-小鼠脾臟單個核細胞TLR2/TLR4表達的鑒定
        3.3.2 MBP 聯(lián)合 BCG 促進 DC 細胞 TLR2 的表達
        3.3.3 MBP聯(lián)合BCG促進DC細胞TLR4的表達
        3.3.4 TLR2對MBP聯(lián)合BCG促進DC細胞CD80、CD86、MHC-II分子表達的影響
        3.3.5 TLR4對MBP聯(lián)合BCG促進DC細胞CD80、CD86、MHC-II分子的表達
        3.3.6 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG刺激DC分泌IL-12p70的影響
+T細胞增殖的影響">        3.3.7 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG通過DC誘導CD4⁺T細胞增殖的影響
        3.3.8 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG通過DC誘導Th1活化的影響
    3.4 討論
    3.5 小結
第4章 MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)對樹突狀細胞的成熟作用及誘導TH1活化的機制研究
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 主要試劑的配制
        4.1.4 主要實驗儀器
    4.2 主要實驗方法
        4.2.1 MBP聯(lián)合BCG免疫小鼠的過程
        4.2.2 免疫小鼠脾臟DC細胞的分離與培養(yǎng)
+T細胞的分離與培養(yǎng)">        4.2.3 免疫小鼠脾臟CD4⁺T細胞的分離與培養(yǎng)
        4.2.4 流式細胞術檢測不同小鼠免疫后DC細胞TLR2和TLR4表達
        4.2.5 流式細胞術檢測不同小鼠免疫后DC細胞CD80、CD86和MHC-II分子表達
+T細胞的培養(yǎng)及增殖檢測">        4.2.6 不同免疫小鼠來源的CD4⁺T細胞的培養(yǎng)及增殖檢測
+T細胞的IFN-γmRNA表達檢測">        4.2.7 不同免疫小鼠來源的CD4⁺T細胞的IFN-γmRNA表達檢測
        4.2.8 統(tǒng)計學處理
    4.3 實驗結果
        4.3.1 MBP聯(lián)合BCG免疫對野生小鼠DC細胞表面TLR2表達的影響
        4.3.2 MBP聯(lián)合BCG免疫對野生小鼠DC細胞表面TLR4表達的影響
        4.3.3 MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)免疫小鼠DC細胞共刺激分子表達的影響
        4.3.4 TLR2對MBP聯(lián)合BCG在體內(nèi)促進DC細胞CD80、CD86和MHC-II分子的表達的影響
        4.3.5 TLR4對MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)免疫小鼠DC細胞共刺激分子表達的影響
+T淋巴細胞增殖的影響">        4.3.6 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)免疫小鼠后CD4⁺T淋巴細胞增殖的影響
+T細胞IFN-γ基因表達的影響">        4.3.7 MBP聯(lián)合BCG免疫對CD4⁺T細胞IFN-γ基因表達的影響
    4.4 討論
    4.5 小結
第5章 結論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]重組人MUC1-MBP融合蛋白誘導小鼠Th1活化[J]. 張淑芳,臺桂香,馬吉春,高航.  免疫學雜志. 2007(04)
[2]重組人MUC1-MBP融合蛋白在大腸桿菌中的表達、純化及其免疫活性測定[J]. 臺桂香,張吉鳳,朱迅.  中國免疫學雜志. 2003(11)



本文編號：3044934