釉結在牙齒發(fā)育中作用的探究及iPS細胞向軟骨方向誘導分化的體外研究
本文關鍵詞:釉結在牙齒發(fā)育中作用的探究及iPS細胞向軟骨方向誘導分化的體外研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:牙齒的發(fā)育是一個長期、復雜的連續(xù)過程,包括牙胚的發(fā)生(initiation)、牙胚形成(morphogenesis)、細胞分化(differentiation)、牙齒萌出(eruption)等幾個階段。釉結是牙胚發(fā)育進入帽狀期和鐘狀期出現(xiàn)的暫時性的結構,在牙發(fā)育后期消失。釉結位于牙胚中央,研究表明,釉結是調節(jié)牙早期形態(tài)發(fā)生的信號中心。因此,本實驗旨在探究釉結在牙齒發(fā)生發(fā)育過程中的重要作用,利用小鼠的牙胚上皮組織與牙胚間充質組織重組移植的方法證實釉結在牙齒形成大小以及牙尖數(shù)量上起著至關重要的作用,隨后用原位雜交方法追蹤釉結的位置。本實驗分別將完整的牙胚上皮組織、去掉釉結部分的牙胚上皮組織釉結組織與牙胚間充質組織重組,進行小鼠腎包膜移植體內實驗以及體外原位雜交實驗,體內移植實驗結果表明,缺少釉結的重組實驗組形成牙齒的大小比其他實驗組小以及牙尖數(shù)量明顯少。體外原位雜交實驗結果表明:即使去掉釉結的上皮部分,在隨后的發(fā)育過程中也會再生出新的釉結。以上實驗結果說明,釉結確實在牙齒發(fā)生發(fā)育過程中是必不可少的一個部分。 由于缺乏合適的種子細胞,在軟骨缺損的臨床治療方面,尚未建立完全有效的技術方法。因此,,軟骨組織工程開發(fā)新的種子細胞來源有著重要的科學意義。干細胞技術是當今再生醫(yī)學研究領域最為前沿的科學,本課題以誘導多能性干細胞為種子來源,通過擬胚體途徑,在體外誘導軟骨形成。我們將體外誘導分化的組織塊進行軟骨的表征實驗,通過QPCR、免疫蛋白印跡、體外免疫染色等實驗方法證實我們誘導的組織塊具備軟骨的表征。最終結果表明該途徑可以成功誘導出具有軟骨特征的組織樣品,從而初步解決了軟骨研究的種子細胞問題,也進一步為軟骨發(fā)生發(fā)育的研究以及軟骨疾病的修復提供了一定的基礎。
【關鍵詞】:牙的發(fā)育 釉結 軟骨 干細胞 分化
【學位授予單位】:吉林大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R333.1
【目錄】:
- 中文摘要4-5
- Abstract5-8
- 第一章 緒論8-18
- 1.1 牙齒的發(fā)生發(fā)育及釉結的發(fā)生發(fā)育8-12
- 1.1.1 牙齒的發(fā)生發(fā)育8-9
- 1.1.2 釉結的發(fā)生發(fā)育9-10
- 1.1.3 釉結與牙齒發(fā)生發(fā)育現(xiàn)狀研究10-12
- 1.2 多能干細胞的相關研究與應用12-13
- 1.3 多能干細胞向軟骨方向分化13-16
- 1.3.1 軟骨的發(fā)生發(fā)育13-14
- 1.3.2 軟骨損傷退變及相關疾病的現(xiàn)狀研究及治療研究14-15
- 1.3.3 多能干細胞體外向軟骨分化的相關研究15-16
- 1.4 目的與意義16
- 1.5 研究思路16-18
- 1.5.1 釉結在牙齒發(fā)生發(fā)育中的重要作用16-17
- 1.5.2 多能干細胞體外向軟骨分化的相關研究17-18
- 第二章 釉結在牙齒發(fā)生發(fā)育中重要作用的探究18-30
- 2.1 實驗動物與實驗耗材18-19
- 2.1.1 實驗動物18
- 2.1.2 實驗器材18
- 2.1.3 實驗試劑18-19
- 2.2 實驗方法19-24
- 2.2.1 14.5 天牙胚的獲取19
- 2.2.2 牙胚上皮與間充質的分離19-20
- 2.2.3 上皮組織與間充質組織的重組與體外培養(yǎng)20
- 2.2.4 腎包膜移植、移植后取樣20-21
- 2.2.5 冰凍組織切片21
- 2.2.6 組織切片蘇木素-伊紅(HE)染色及顯微鏡下觀察21
- 2.2.7 處理培養(yǎng)牙胚以及處理后牙胚的腎包膜移植21-22
- 2.2.8 組織原位雜交22-24
- 2.3 實驗結果與討論24-29
- 2.3.1 牙胚的分離形態(tài)觀察及釉結的識別切割24-25
- 2.3.2 重組牙胚的移植結果25-26
- 2.3.3 重組后牙齒的染色形態(tài)觀察26-27
- 2.3.4 體外培養(yǎng)不同組重組牙胚的釉結-FGF4 原位雜交定位27-29
- 2.4 小結29-30
- 第三章 誘導多能干細胞向軟骨方向分化的體外研究30-46
- 3.1 實驗耗材30-31
- 3.1.1 實驗器材30
- 3.1.2 實驗試劑30-31
- 3.2 實驗方法31-39
- 3.2.1 細胞的準備31-32
- 3.2.2 擬胚體(embryonic body, EB)的制備32
- 3.2.3 向軟骨方向誘導分化32-33
- 3.2.4 分化過程中樣品的收集33
- 3.2.5 RNA 的提取33-34
- 3.2.6 RNA 反轉錄34
- 3.2.7 qRT-PCR 檢測34-35
- 3.2.8 形態(tài)觀察35
- 3.2.9 冰凍切片35
- 3.2.10 組織切片蘇木素-伊紅(HE)染色及顯微鏡下觀察35
- 3.2.11 阿利新藍染色(Alcian blue staining,AB)35
- 3.2.12 免疫組織化學染色35-36
- 3.2.13 免疫印跡實驗(Western blot)36-39
- 3.3 實驗結果與討論39-45
- 3.3.1 iPSCs/ESCs 向軟骨方向誘導分化過程中形態(tài)的變化39-40
- 3.3.2 iPSCs/ESCs 向軟骨方向分化的形態(tài)觀察40
- 3.3.3 iPSCs/ESCs 向軟骨方向誘導分化前期中胚層基因表達情況40-41
- 3.3.4 iPSCs/ESCs 向軟骨方向誘導分化不同時期軟骨相關基因表達情況41-42
- 3.3.5 iPSCs/ESCs 誘導成軟骨的胞外基質表達情況42-44
- 3.3.6 iPSCs/ESCs 誘導成軟骨的胞外蛋白分泌情況44-45
- 3.4 小結45-46
- 參考文獻46-49
- 作者簡介49
- 已發(fā)表論文49-50
- 致謝50
【共引文獻】
中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 XIE ShuJuan;ZHANG Yin;QU LiangHu;XU Hui;;A Helm model for microRNA regulation in cell fate decision and conversion[J];Science China(Life Sciences);2013年10期
2 甘鵬;熊亮;賈文超;潘傳英;藍賢勇;陳宏;;牛c-Myc/TAT/9R融合表達載體構建及其原核表達研究[J];家畜生態(tài)學報;2013年10期
3 熊東海;Raymond U.Osarogiagbon;王嫣;尤明;;驅動基因作為肺癌預防和治療的靶標(英文)[J];化學進展;2013年09期
4 WU GengZe;HUANG Zhan-Peng;WANG Da-Zhi;;microRNAs in cardiac regeneration and cardiovascular disease[J];Science China(Life Sciences);2013年10期
5 文波;劉紅光;;乳腺癌干細胞分選方法研究進展[J];腫瘤藥學;2013年05期
6 譚笑;汪年松;;干細胞治療糖尿病腎病的研究進展[J];中國中西醫(yī)結合腎病雜志;2013年08期
7 HUANG Ke;LIU PengFei;LI Xiang;CHEN ShuBin;WANG LiHui;QIN Li;SU ZhengHui;HUANG WenHao;LIU JuLi;JIA Bei;LIU Jie;CAI JingLei;PEI DuanQing;PAN GuangJin;;Neural progenitor cells from human induced pluripotent stem cells generated less autogenous immune response[J];Science China(Life Sciences);2014年02期
8 Ning Shi;Shi-You Chen;;Mechanisms simultaneously regulate smooth muscle proliferation and differentiation[J];The Journal of Biomedical Research;2014年01期
9 鄧彥飛;劉真真;李云芳;劉慶友;羅嬋;楊素芳;石德順;;不同逆轉錄載體系統(tǒng)應用于水牛胎兒成纖維細胞轉基因的探索[J];華南農業(yè)大學學報;2013年04期
10 王愷龍;張帆鄭;李彬;徐邢賓;李旭麗;張帆;張瑾;;基因修飾豬技術的應用與展望[J];核農學報;2013年11期
中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條
1 楊淋清;羅凌鳳;吳德生;龔春梅;黃海燕;周麗;楊細飛;劉建軍;莊志雄;;雙酚A對小鼠胚胎干細胞兩種干性因子表達水平的影響[A];2012深圳市預防醫(yī)學會學術研討會論文匯編[C];2012年
2 周燦權;李宇彬;;研究中的生殖醫(yī)學技術[A];中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會第二次全國生殖臨床學術研討會論文匯編[C];2012年
3 張可華;袁寶珠;;治療性干細胞產(chǎn)品相關的風險因素[A];2012年中國藥學大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年
中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 賈蓓;A型血友病人非整合誘導多能干細胞建系及其細胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學;2012年
2 申晶;骨髓源間充質干細胞輸注促進STZ誘導的糖尿病大鼠胰腺內α細胞向β細胞的轉變:糖尿病治療的新模式[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2013年
3 朱玉德;膠質瘤干細胞的生物學特性及其與膠質瘤血管發(fā)生的關系[D];蘇州大學;2013年
4 叢義梅;豬原始生殖細胞體內跟蹤、體外培養(yǎng)及遺傳印記的研究[D];東北農業(yè)大學;2013年
5 陳雪梅;人胚胎干細胞傳代培養(yǎng)和神經(jīng)誘導分化過程中基因組遺傳變異的動態(tài)變化[D];鄭州大學;2013年
6 李遠;雜合型重編程Oct4聯(lián)合多能干細胞因子表現(xiàn)重編程人腦膠質瘤細胞的研究[D];鄭州大學;2013年
7 靳木子;阿爾巴斯白絨山羊與綿羊胚胎干細胞培養(yǎng)技術的研究[D];內蒙古大學;2013年
8 袁建龍;利用體細胞核移植技術生產(chǎn)轉基因絨山羊的研究[D];內蒙古大學;2013年
9 梅宇欽;黃酮類化合物庫內小分子4a經(jīng)由PPAR-β-Mfn2-[Ca~(2+)]_M信號調控胚胎干細胞神經(jīng)分化[D];浙江大學;2013年
10 楊梅;NAIF1基因在胃癌細胞中的功能與機理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年
中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條
1 周娟;低劑量力達霉素通過下調Oct4抑制小鼠胚胎癌細胞P19生長機制的研究[D];吉林大學;2013年
2 王振;造血系統(tǒng)關鍵轉錄因子的慢病毒載體構建及表達[D];山東師范大學;2013年
3 侯歌;胃癌組織中PCNA、Ki-67、Nanog、Oct-4的表達與復發(fā)轉移的關系[D];鄭州大學;2013年
4 陳明;骨髓單個核細胞在腦缺血大鼠腦內受損區(qū)域的定向分化[D];鄭州大學;2013年
5 費璇;KLF4在大鼠晶狀體損傷促進視神經(jīng)再生過程中的表達[D];鄭州大學;2013年
6 雷學華;重編程因子對小鼠組蛋白H3K4/27甲基化酶基因啟動子活性的影響[D];安徽大學;2013年
7 鄧玉金;應用小鼠ESCs體外誘導己分化體細胞為iPSCs的異性來源鑒別體系研究[D];西南大學;2013年
8 趙龍彪;烏司他丁對急性心肌梗死大鼠心臟的保護作用[D];河北醫(yī)科大學;2013年
9 曹玲玲;Hemin誘導K562細胞向紅系細胞分化和胞質雜交體的蛋白質組學及NPM1功能的初步研究[D];浙江理工大學;2013年
10 孟泳圳;卵巢上皮癌側群細胞(side population,Sp)研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年
本文關鍵詞:釉結在牙齒發(fā)育中作用的探究及iPS細胞向軟骨方向誘導分化的體外研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號:300624
本文鏈接:http://www.sikaile.net/yixuelunwen/jichuyixue/300624.html