目的將阿奇霉素（AZM）通過衍生形成半抗原,制備小鼠抗阿奇霉素單克隆抗體（mAb）,初步鑒定其特性。方法采用活性酯法使AZM與載體牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶聯(lián),合成免疫抗原AZM-BSA和檢測抗原AZM-OVA。用AZM-BSA免疫BALB/c小鼠,通過雜交瘤技術(shù)獲得雜交瘤細(xì)胞株50D10。將該細(xì)胞株注射BALB/c小鼠制備AZM mAb,并以此mAb建立ELISA檢測AZM的方法。結(jié)果 AZM mAb的效價為1∶4.0×10⁵,屬于IgG1型。建立的間接競爭ELISA（icELISA）靈敏度為0.287μg/L,半數(shù)抑制濃度(IC₅₀)為1.33μg/L。AZM mAb與紅霉素、羅紅霉素、多拉菌素、克拉霉素、替米考星和泰樂菌素的交叉反應(yīng)率均小于0.1%。牛奶中AZM的添加回收率在79.6%～104.1%之間,變異系數(shù)在16.4%～27.3%之間。結(jié)論制備出靈敏度高、特異性強(qiáng)的AZM mAb,為AZM的快速檢測方法的建立奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2020,36(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

AZM人工抗原的合成路線圖

本研究制備的半抗原為AZM-GA, AZM-GA的Mr為862, 正離子和負(fù)離子質(zhì)譜鑒定結(jié)果分別是863和861(圖2)。與AZM-GA加上或者去掉一個質(zhì)子的Mr相吻合, 說明AZM-GA衍生物偶聯(lián)成功。再用活化酯法將AZM-GA與載體蛋白(BSA、 OVA)分子上的氨基偶聯(lián)起來, 形成穩(wěn)定的酰胺鍵, 即合成完全抗原。由于AZM沒有特征的紫外吸收峰所以無法用紫外吸收光譜法進(jìn)行鑒定, 我們采用免疫學(xué)檢測手段, 即二次免疫之后檢測小鼠尾尖血效價。盡管耗時較久, 但此方法更直觀也更準(zhǔn)確。免疫過的5只小鼠血清效價至少達(dá)到1∶25 600(圖3), 表明AZM人工抗原的制備是成功的。圖3 二次免疫后小鼠的血清效價

二次免疫后小鼠的血清效價


本文編號：3004462