目的對按標準化工藝流程制備的人臍帶間充質干細胞（hUC-MSCs）制劑進行微生物學安全性評價。方法人臍帶華通氏膠分離的間充質干細胞培養(yǎng)擴增至P5代。顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)特征,流式細胞儀檢測細胞表面標志物的表達;培養(yǎng)法檢測細菌、真菌污染,指示劑培養(yǎng)顯色法和快速聚合酶鏈反應（PCR）法檢測支原體污染,鱟試劑凝膠法檢測細菌內毒素;膠體金法檢驗特定人源病毒、梅毒螺旋體;熒光定量PCR法檢測人乳頭瘤病毒（HPV）。結果按照標準化流程分離培養(yǎng)hUC-MSCs傳代至P5代呈均一的長梭型成纖維細胞樣貼壁生長,細胞表面標志物CD73、CD90和CD105陽性率大于98%,CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR<2%;受檢人臍帶間充質干細胞鱟試劑凝膠法檢測內毒素水平小于0.25EU/mL,培養(yǎng)檢測未見細菌、真菌菌落生長,指示劑培養(yǎng)顯色法和快速PCR檢測均顯示無支原體污染;膠體金法和熒光定量PCR法檢測特定人源病毒、梅毒螺旋體和HPV（包含18種高危亞型）全部為陰性結果。所有檢測方法的陽性對照標本均呈陽性結果,證實檢測方法穩(wěn)定可靠。結論本研究采用的標準化干細胞制備工藝流程穩(wěn)定可靠,采用... 

【文章來源】：重慶醫(yī)學. 2020,49(12)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

第5代人臍帶間充質干細胞在光鏡下的形態(tài)特征（×100)

檢查結果顯示第5代次的hUC-MSCs的表面標志物CD73、CD90、CD105陽性表達率均大于98%,CD34、CD14、CD45、CD19、HLA-DR陽性表達率均小于2%，見圖2。2.3 細菌、真菌污染檢測結果

支原體指示劑培養(yǎng)顯色法檢測結果顯示，陽性對照組和實驗組hUC-MSCs的培養(yǎng)基顏色相差極大，可見明顯差異；陰性對照組和實驗組hUC-MSCs的培養(yǎng)基顏色接近。通過快速PCR檢測法檢測結果顯示，實驗組和陰性對照組只呈現(xiàn)內參條帶產生，陽性組則有很亮的支原體特異條帶出現(xiàn)。支原體指示劑培養(yǎng)顯色法和快速PCR檢測法檢測結果均為陰性，未發(fā)現(xiàn)支原體污染，見圖4。圖4 支原體檢測結果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長期傳代培養(yǎng)對人臍帶間充質干細胞生物學特性的影響[J]. 張權,張亞奇,饒巍,周端鵬,韓兵,武棟成.  中國細胞生物學學報. 2019(01)
[2]微滴單細胞培養(yǎng)技術應用于白色念珠菌培養(yǎng)的研究[J]. 余一海,陳耀,石星亮,麥惠簡,譚有將,蔡乃增,戴盡波,陳靜,梁惠堯.  熱帶醫(yī)學雜志. 2018(07)
[3]細菌內毒素法和熱原法檢測順鉑注射液的比較試驗[J]. 施梅,仝立卿,王丹飛.  海峽藥學. 2017(12)
[4]多種方法去除人肝癌細胞系C3A支原體污染效果及比較[J]. 李陽,傅超毅,翁駿,高毅,彭青.  中華微生物學和免疫學雜志. 2016 (10)
[5]干細胞制劑制備質量管理自律規(guī)范[J].   中國醫(yī)藥生物技術. 2016(06)
[6]細胞培養(yǎng)無菌技術及有效控制污染的措施[J]. 周夢怡,勇強,徐莉.  實驗與檢驗醫(yī)學. 2016(04)
[7]細胞培養(yǎng)過程中支原體污染的防治與檢測方法[J]. 邢龍彬,劉長政,焦曉磊,劉彤,杜智,高英堂.  世界華人消化雜志. 2016(10)
[8]獸藥GMP廠房內污染原因及防制措施[J]. 李宏英.  江西畜牧獸醫(yī)雜志. 2013(06)



本文編號：2991101