發(fā)布時間：2021-01-17 08:23

　　目的建立皮內(nèi)注射用卡介苗（Bacillus Calmette Guerin vaccine,BCG）特異性鑒別試驗的多重PCR法,并進行驗證。方法根據(jù)GenBank登錄的Pasteur 1173P2株序列（AM408590. 1）設計并合成引物,以制備的BCG特異性鑒別試驗國家參考品（簡稱BCG鑒別參考品）DNA為模板,多重PCR法擴增其特異性缺失區(qū)RD1,產(chǎn)物經(jīng)3%瓊脂糖凝膠電泳鑒定,驗證方法的重復性、中間精密度、特異性、耐用性及靈敏度;采用該方法檢測8批皮內(nèi)注射用BCG供試品。結(jié)果 BCG鑒別參考品在重復檢測6次、2名檢測人員分別重復檢測3 d、不同PCR退火溫度及不同DNA聚合酶加量時均擴增出約200 bp的核酸片段;最低可檢10 pg/mL的目的基因,僅對結(jié)核分枝桿菌H37Rv及皮內(nèi)注射用BCG樣品DNA擴增出特異性條帶。經(jīng)該方法檢測,8批供試品PCR產(chǎn)物電泳均可見單一的目的條帶,無RD1序列存在,大小與BCG鑒別參考品一致。結(jié)論多重PCR法的重復性、中間精密度、特異性、耐用性及靈敏度良好,可應用于皮內(nèi)注射用BCG特異性鑒別試驗。 

【文章來源】：中國生物制品學雜志. 2020,33(02)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

BCG鑒別參考品中間精密度驗證PCR產(chǎn)物電泳圖

PCR方法的特異性驗證電泳圖

PCR不同退火溫度BCG鑒別參考品PCR產(chǎn)物電泳圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]卡介苗生產(chǎn)用菌株的遺傳穩(wěn)定性研究[J]. 程鵬飛,劉朝陽,陳艷紅,徐帆洪,馬相虎.  中國生物制品學雜志. 2013(10)
[2]國內(nèi)外卡介菌的分子遺傳學特性[J]. 趙愛華,賈淑珍,寇麗杰,喬來艷,王國治.  中國生物制品學雜志. 2009(06)



本文編號：2982522