本文關(guān)鍵詞：水凝膠培養(yǎng)的原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞感染Ⅱ型登革病毒對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生IL-29的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：登革病毒(Dengue virus,DENV)是一種蟲(chóng)媒病毒,主要是通過(guò)白紋伊蚊和埃及伊蚊進(jìn)行傳播,每年約有5000萬(wàn)-5.28億人口受到感染。DENV感染可以引起登革熱(Dengue Fever,DF)和危及生命的登革出血熱(Dengue hemorrhagic fever,DHF)及登革休克綜合征(Dengue shock syndrome,DSS),其中DHF/DSS是重癥的登革病毒感染,其主要的特征之一是血漿滲漏。目前普遍認(rèn)為DHF/DSS的發(fā)病機(jī)制主要包括病毒毒力因素,抗體依賴性感染增強(qiáng)效應(yīng)(antibody-dependent enhancement,ADE),宿主因素,交叉反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理?yè)p傷以及細(xì)胞因子風(fēng)暴等。眾多發(fā)病機(jī)制的提出主要是因?yàn)槟Ｐ偷牟煌?目前小鼠、人血管內(nèi)皮細(xì)胞主要以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)作為研究DENV感染發(fā)病機(jī)制的主要模型,但小鼠模型的運(yùn)用并不能完全模擬人類的感染情況,細(xì)胞模型則因作用因素單一也不能確切的反映感染癥狀。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)組織基底硬度是影響細(xì)胞功能的主要因素之一,正常生理?xiàng)l件下血管基底膜及下層基質(zhì)的彈性硬度值影響了多種與血管內(nèi)皮細(xì)胞生存、復(fù)制、遷徙和維持穩(wěn)態(tài)的重要生物學(xué)功能,不同彈性硬度條件下這些生物學(xué)功能水平差異較大。當(dāng)前利用聚丙烯酰胺凝膠構(gòu)建不同的組織硬度可以影響細(xì)胞的生物學(xué)功能,使其能夠更貼近生理環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)水凝膠模擬人血管內(nèi)皮細(xì)胞基底膜彈性硬度,使體外模型的建立能夠更貼近生理環(huán)境,為DENV發(fā)病機(jī)制的研究提供一個(gè)新的研究模型。目的利用水凝膠(hydrogel)模擬人類血管內(nèi)皮細(xì)胞基底膜彈性硬度,以登革病毒2型(DENV-2)NGC株感染接種于水凝膠為基底的原代HUVECs,觀察HUVECs在水凝膠與普通塑料培養(yǎng)瓶產(chǎn)生IL-29的情況。方法1.原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定:從健康新生兒的臍帶中分離并培養(yǎng)原代HUVECs,利用免疫組織化學(xué)法和流式細(xì)胞術(shù)鑒定所分離的細(xì)胞。2.水凝膠的制備和細(xì)胞接種:將原代HUVECs接種于丙烯酰胺與聚丙烯酰胺混合配制的水凝膠。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡及感染率:以MOI(multiplicity of infection)=10的DENV-2 NGC株感染HUVECs,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)48h細(xì)胞的凋亡率及病毒的感染率。4.基因芯片檢測(cè):提取DENV-2感染48h的接種于水凝膠和普通塑料瓶的原代HUVECs的總m RNA,送檢樣本進(jìn)行基因表達(dá)譜芯片的檢測(cè)。5.實(shí)時(shí)定量PCR(real-timequantitative PCR,q RT-PCR)及雙抗體夾心ELISA法實(shí)驗(yàn):通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR及雙抗體夾心ELISA法驗(yàn)證基因芯片檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果DENV-2 NGC株感染培養(yǎng)于水凝膠的原代HUVECs 48h,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)證實(shí)原代HUVECs的病毒感染率較低,細(xì)胞凋亡率與水凝膠未感染組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);通過(guò)m RNA基因表達(dá)譜芯片、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL-29的表達(dá)與普通塑料細(xì)胞培養(yǎng)瓶接種的原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞受到病毒感染存在差異(P0.05)。結(jié)論利用DENV-2NGC株感染接種于水凝膠的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,通過(guò)m RNA基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IL-29的產(chǎn)生,并且與體外正常培養(yǎng)條件下受到DENV-2 NGC株感染后存在差異,可能為DENV的發(fā)病機(jī)制研究提供新的模型。
【關(guān)鍵詞】：DENV IL-29 水凝膠 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R373.33;R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 中英文對(duì)照縮略詞表9-10
• 0 引言10-13
• 1 材料與方法13-28
• 2 結(jié)果28-35
• 3 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 綜述46-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 作者簡(jiǎn)歷56-57
• 致謝57-58
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集58

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 盧偉成;細(xì)胞的壽命無(wú)限嗎?[J];自然雜志;1978年01期

2 鄭麗君;夏文美;童村;;HeLa細(xì)胞的培養(yǎng)與使用[J];醫(yī)藥工業(yè);1983年10期

3 岳奎元;細(xì)胞的社會(huì)關(guān)系[J];生物學(xué)雜志;1987年06期

4 李保興;細(xì)胞大小芻議[J];生物學(xué)通報(bào);1999年08期

5 陳必良,穆潤(rùn)華,馬向東,王德堂,辛?xí)匝?鄭維國(guó),嚴(yán)瑞蘭;特異性反義寡核苷酸對(duì)含HPV16的SiHa細(xì)胞的作用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

6 Paul Nurse ,王福彭;細(xì)胞及其增殖、調(diào)控機(jī)制的發(fā)現(xiàn)歷程[J];世界科學(xué);2002年04期

7 Frederick Cahn;王全勝;;培養(yǎng)基動(dòng)物細(xì)胞用微孔載體及其生物材料[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).生物醫(yī)學(xué)工程分冊(cè);1990年06期

8 樂(lè)志培，王仁云;細(xì)胞第二代謝體系[J];生命的化學(xué)(中國(guó)生物化學(xué)會(huì)通訊);1994年01期

9 楊頻,薛紹武;細(xì)胞無(wú)機(jī)化學(xué)研究中需要關(guān)注的幾個(gè)方面[J];化學(xué)進(jìn)展;2004年04期

10 陶慧敏;王文文;關(guān)燕清;;細(xì)胞程序式死亡途徑的新進(jìn)展[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2008年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉令九;趙小琳;岳立廣;徐艷玲;李淑焱;侯麗娟;隋紅;姜崴;謝寶生;李勇;劉兵;李海濱;;細(xì)胞工廠培養(yǎng)人胚肺二倍體細(xì)胞制備凍干甲型肝炎減毒活疫苗[A];2011中國(guó)生物制品年會(huì)暨第十一次全國(guó)生物制品學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

2 宋征;;應(yīng)用Bhas42細(xì)胞試驗(yàn)檢測(cè)22個(gè)腫瘤促長(zhǎng)基因標(biāo)志物[A];2013年（第三屆）中國(guó)藥物毒理學(xué)年會(huì)暨藥物非臨床安全性評(píng)價(jià)研究論壇論文摘要[C];2013年

3 谷彬;張輝;喻澤蘭;;依地福新對(duì)Jurkat細(xì)胞生長(zhǎng)抑制機(jī)制的研究[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

4 武冬梅;李秀娥;葛莉亞;袁星;;雙酚-A對(duì)MCF-7細(xì)胞伏安行為的影響[A];第五屆全國(guó)環(huán)境化學(xué)大會(huì)摘要集[C];2009年

5 李曉飛;呂超;吳小榮;韓慶玲;王杰;易宗春;;鉛和鋁離子對(duì)K562細(xì)胞紅系分化的影響[A];全國(guó)生化/工業(yè)與衛(wèi)生毒理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

6 宋為民;郭波;;復(fù)方甘草酸苷對(duì)HaCaT細(xì)胞表達(dá)AQP3的影響[A];2011全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

7 劉魯明;錢華;陳震;林勝友;黃挺;;參麥注射液對(duì)腫瘤細(xì)胞環(huán)核甘酸的影響[A];全國(guó)中醫(yī)藥科研與教學(xué)改革研討會(huì)論文集[C];2000年

8 張雪玲;糜漫天;李等松;韋娜;張乾勇;楊志祥;;Lovastatin對(duì)HL-60細(xì)胞HMG-CoA還原酶mRNA表達(dá)及細(xì)胞增殖功能的影響[A];中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)特殊營(yíng)養(yǎng)第五屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2002年

9 房佰俊;廖聯(lián)明;楊少光;史明霞;趙春華;;胎兒骨髓源原始干細(xì)胞分離純化及其生物學(xué)特性的初步研究[A];第九屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2003年

10 李曉軍;朱傳東;汪萍;賈麗;陳芳芳;夏欣一;陳龍邦;;人Id3基因在A549細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)功能的研究[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 吳春燕 通訊員 寧習(xí)源 吳劍鵬;人類情緒可影響干細(xì)胞生長(zhǎng)[N];光明日?qǐng)?bào);2014年

2 馮衛(wèi)東;老化干細(xì)胞可轉(zhuǎn)變成年輕干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

3 常麗君;科學(xué)家闡明核內(nèi)周期運(yùn)作機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

4 本版編輯邋杜華斌 邰舉 毛文波 顧鋼 陳超 何屹 毛黎;2007年世界科技發(fā)展回顧(六)[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

5 通訊員 李靜;廈大教授發(fā)現(xiàn)細(xì)胞防癌“玄機(jī)”[N];廈門日?qǐng)?bào);2009年

6 永誠(chéng);美發(fā)現(xiàn)控制細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

7 記者 張孟軍;加找到刺激干細(xì)胞生長(zhǎng)分子[N];科技日?qǐng)?bào);2001年

8 張?zhí)锟?干細(xì)胞研究精彩紛呈[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

9 邵薇/編譯;T細(xì)胞的非凡能力[N];北京科技報(bào);2003年

10 經(jīng)天;控制細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)[N];中藥事業(yè)報(bào);2000年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 蔣淵;缺氧肝癌細(xì)胞中HIF-1和NF-κB的相互作用及其分子機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 楊小超;陽(yáng)離子配體修飾的納米金用于細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)和微囊自組裝研究[D];重慶大學(xué);2010年

3 葉玲玲;基于生物素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的HEK293細(xì)胞多基因代謝工程改造[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

4 梁國(guó)斌;產(chǎn)朊假絲酵母生產(chǎn)谷胱甘肽過(guò)程控制與優(yōu)化[D];江南大學(xué);2008年

5 楊海虹;鈣池操縱性鈣內(nèi)流在人肺腺癌A549細(xì)胞中的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

6 常玉娟;基于Nrf2/ARE通路辛開(kāi)苦降方胃康寧對(duì)人胃粘膜上皮細(xì)胞SOD2、GSTP1相關(guān)調(diào)控機(jī)制的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

7 楊麗君;人Fcα/μR的表達(dá)與功能的初步研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 李曼;DRC3f及eRF3b在肝病發(fā)生發(fā)展中作用機(jī)制的初步研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

9 王永軍;凋亡/增殖平衡失調(diào)在肺癌發(fā)生中作用的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

10 徐鶯鶯;全反式維甲酸誘導(dǎo)N-乙酰氨基葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶V表達(dá)受阻的肝癌細(xì)胞通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑發(fā)生凋亡的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 柯自立;硫酸鎂對(duì)6-羥基多巴胺損傷的SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李婷婷;細(xì)胞穿透肽VP22對(duì)抑癌蛋白PTEN體外抗腫瘤作用影響的研究[D];川北醫(yī)學(xué)院;2015年

3 王靜;環(huán)氧化物酶抑制劑NS-398聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 鄭祿祿;番茄紅素對(duì)轉(zhuǎn)染SOD1-G93A的PC12細(xì)胞線粒體的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 宋晨源;氯化銨對(duì)人正常肝細(xì)胞系changliver中二氫乳清酸脫氫酶表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

6 張莉;白藜蘆醇體外抑制腸道病毒71型的作用機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2015年

7 高華武;富硒芪云抗腫瘤作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 宋加奎;丹參對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞化療敏感性的影響[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

9 許雅鑫;尼古丁對(duì)NCI-H1975和NCI-H460細(xì)胞促進(jìn)增殖作用及對(duì)PI3K/Akt通路的影響研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 高娜;加減駐景方含藥血清對(duì)二氯化鈷誘導(dǎo)后ARPE-19細(xì)胞表達(dá)VEGF及HIF-1α的影響[D];青海大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：水凝膠培養(yǎng)的原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞感染Ⅱ型登革病毒對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生IL-29的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：295603