發(fā)布時(shí)間：2021-01-02 18:19

　　目的探討組蛋白去乙�；�2（histone deacetylase 2,HDAC2）在D-半乳糖（D-galactose）誘導(dǎo)的衰老心肌細(xì)胞自噬水平降低中的作用。方法使用D-galactose刺激大鼠心肌細(xì)胞H9c2衰老后,β-半乳糖苷酶染色驗(yàn)證模型是否成功;透射電鏡觀察未給予D-galactose對(duì)照（control）組與給予D-galactose組的自噬情況;Western Blot檢測(cè)LC3B及p62的蛋白表達(dá);分別采用qRT-PCR與Western Blot檢測(cè)control組與D-galactose組HDAC2的mRNA與蛋白表達(dá);同時(shí),D-galactose組干擾HDAC2的表達(dá)后,Western Blot檢測(cè)HDAC2的自身表達(dá)及LC3B與p62的蛋白表達(dá),免疫熒光染色觀察LC3B的定位及表達(dá);最后,Western Blot檢測(cè)control組與D-galactose組H3K14ac的蛋白表達(dá);D-galactose組干擾HDAC2的表達(dá)后,Western Blot檢測(cè)H3K14ac的蛋白表達(dá)。結(jié)果成功復(fù)制了衰老心肌細(xì)胞模型;經(jīng)過(guò)D-galactose干預(yù)后,細(xì)胞內(nèi)的自噬... 

【文章來(lái)源】：實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志. 2020年09期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

電鏡觀察control與D-galactose組中自噬水平的改變

透射電鏡結(jié)果顯示，正常心肌細(xì)胞中可見(jiàn)細(xì)胞器膜結(jié)構(gòu)完整，多個(gè)自噬小泡包裹待降解底物形成自噬小體結(jié)構(gòu)。而衰老誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞中，線粒體數(shù)量明顯增多，少有自噬結(jié)構(gòu)形成，自噬水平降低。見(jiàn)圖2。圖2 電鏡觀察control與D-galactose組中自噬水平的改變

為進(jìn)一步明確HDAC2在衰老心肌細(xì)胞自噬水平降低中的作用，將HDAC2干擾病毒及對(duì)照病毒感染衰老心肌細(xì)胞后，Western Blot首先驗(yàn)證了病毒感染效率，隨后檢測(cè)了LC3B及p62的蛋白表達(dá)，最后通過(guò)免疫熒光染色觀察LC3B的表達(dá)情況。D-galactose組中的Ad-shHDAC2與Ad-shNC相比，HDAC2蛋白表達(dá)降低（P<0.05），證實(shí)病毒感染成功。同時(shí)，干擾HDAC2后LC3BⅡ/Ⅰ明顯降低，p62表達(dá)水平明顯升高（P<0.05），與上述得出的HDAC2與自噬水平之間關(guān)系一致。LC3B熒光強(qiáng)度更低，進(jìn)一步證實(shí)了HDAC2的低表達(dá)能夠促進(jìn)衰老心肌細(xì)胞自噬水平的降低。見(jiàn)圖5。圖4 control組與D-galactose組中HDAC2的mRNA及蛋白表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]心肌細(xì)胞衰老對(duì)心臟重構(gòu)的影響和調(diào)控機(jī)制研究[D]. 崔素梅.山東大學(xué) 2019



本文編號(hào)：2953403