發(fā)布時間：2020-12-31 17:08

　　目的優(yōu)化乙型流感病毒在無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞上的增殖條件。方法以乙型流感病毒感染無血清懸浮培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞,對培養(yǎng)條件中的MOI(10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7)、胰酶終濃度（2. 5、5、7. 5、10、15、20μg/mL）、細(xì)胞接毒密度（50×10⁴、100×10⁴、300×10⁴、500×10⁴、700×10⁴個/mL）及病毒收獲時間（24、48、72、96、120 h）進(jìn)行優(yōu)化。同時對流感病毒在貼壁培養(yǎng)及無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞上的增殖情況進(jìn)行比較。結(jié)果乙型流感病毒在無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞上最適增殖條件為:MOI為10^-2、胰酶終濃度為10μg/m L、細(xì)胞接毒密度為300×10⁴個/mL、病毒收獲時間為72 h。流感病毒在... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2020年05期

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

不同MOI對流感病毒HA血凝滴度（A）及活細(xì)胞密度（B）的影響

隨著胰酶終濃度逐漸增高，感染72及96 h時，病毒的HA血凝滴度呈先上升后降低的趨勢。胰酶終濃度為10μg/m L時，感染72 h時病毒HA血凝滴度可達(dá)最高值（9.99±0.57)log2(HAU/25μL）；胰酶終濃度>10μg/mL時，HA血凝滴度降低，各組間HA血凝滴度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.14,P=0.095）。隨著胰酶終濃度的升高，活細(xì)胞密度降低。見圖2。因此確定最適胰酶終濃度為10μg/mL。2.3 不同細(xì)胞接毒密度對流感病毒增殖的影響

感染72及96 h，各組間HA血凝滴度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=9.04,P=0.030）。感染72 h時，300×104個/mL組HA血凝滴度達(dá)最高值（10.6±0.73)log2(HAU/25μL）；細(xì)胞密度過�。�50×104個/mL）或過大（700×104個/mL）時，HA血凝滴度均較低；細(xì)胞密度為（300～500）×104個/mL時，病毒HA血凝滴度較高，在該區(qū)間內(nèi)，細(xì)胞密度越大病毒HA血凝滴度越低。見圖3。因此確定300×104個/mL為最適細(xì)胞密度。2.4 收獲時間對流感病毒增殖的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]流感病毒細(xì)胞培養(yǎng)時胰酶添加量的優(yōu)化分析[J]. 慕毓.  中國城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生. 2016(06)
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[3]廣譜流感疫苗的研究進(jìn)展[J]. 謝辛慈,劉璐,袁松華,張曉燕,徐建青.  微生物與感染. 2016(01)
[4]穩(wěn)定表達(dá)跨膜絲氨酸蛋白酶2基因的MDCK細(xì)胞系的建立[J]. 呂讓,王丹,宋彩玲,齊賓賓,劉明.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(09)



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