目的比較全骨髓貼壁法和骨組織消化法分離獲取骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stemcells,BMMSCs）的效果。方法分離獲取小鼠股骨,沖洗骨髓腔并收集骨髓懸液培養(yǎng)BMMSCs為全骨髓貼壁法;去骨髓的股骨剪碎、消化后培養(yǎng)BMMSCs為骨組織消化法。比較兩組BMMSCs的原代細胞數(shù)量、細胞生長曲線、細胞傳代增殖能力、免疫表型及成骨分化潛能。結(jié)果骨組織消化法的BMMSCs原代細胞數(shù)量明顯多于全骨髓組,并且在第7天細胞就可以融合達到90%;骨組織組的BMMSCs生長快,并且細胞傳代增殖能力比全骨髓組強,傳代計數(shù)實驗顯示第5次傳代后,骨組織組的細胞數(shù)量達全骨髓組的4倍（P<0.05）;流式表型鑒定結(jié)果顯示,兩組細胞均高表達干細胞表面標志物Sca-1及表面黏附分子CD29,其中骨組織組Sca-1及CD29陽性細胞的比例均高于全骨髓組;骨組織組BMMSCs幾乎不表達CD45和CD11b,而全骨髓組CD45陽性細胞的比例為3.18%,CD11b陽性細胞的比例為9.11%。兩組BMMSCs均能分化為成骨細胞。結(jié)論骨組織消化法操作簡單、成本低,且獲得的BMMSC... 

【文章來源】：嶺南心血管病雜志. 2020年02期

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

成骨誘導分化結(jié)果

分離接種后全骨髓組見大量圓形懸浮細胞，而骨組織組未見懸浮細胞。72 h后可見兩組均有大量梭形細胞貼壁，其中全骨髓組細胞散落貼壁，骨組織組細胞呈集落狀于骨碎片周圍貼壁生長。全骨髓組BMMSCs細胞生長緩慢，培養(yǎng)至第7天可見細胞融合達80%～90%；骨組織組BMMSCs成簇生長，較全骨髓組生長快，培養(yǎng)至第5天可見細胞融合達80%～90%，兩組細胞形態(tài)一致，均呈長梭形貼壁生長（如圖1）。兩組原代BMMSCs細胞融合達到80%～90%時分別進行傳代。全骨髓組BMMSCs細胞傳代前用PBS清洗以除去非貼壁細胞。兩組BMMSCs傳至第3、第6和第9代時細胞形態(tài)如圖2所示，可見均為長梭形貼壁細胞。兩組BMMSCs細胞中的非貼壁圓形細胞均隨純化代數(shù)的增加而降低。取第3代以后的BMMSCs進行細胞流式術和成骨分化實驗。

兩組原代BMMSCs細胞融合達到80%～90%時分別進行傳代。全骨髓組BMMSCs細胞傳代前用PBS清洗以除去非貼壁細胞。兩組BMMSCs傳至第3、第6和第9代時細胞形態(tài)如圖2所示，可見均為長梭形貼壁細胞。兩組BMMSCs細胞中的非貼壁圓形細胞均隨純化代數(shù)的增加而降低。取第3代以后的BMMSCs進行細胞流式術和成骨分化實驗。2.2骨髓間充質(zhì)干細胞的生長趨勢及增殖能力比較

【參考文獻】：
期刊論文
[1]骨髓間充質(zhì)干細胞治療炎癥性腸病研究進展[J]. 崔國寧,劉喜平.  今日藥學. 2019(01)



本文編號：2949816