發(fā)布時(shí)間：2017-04-09 09:10

  本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞過程中GATA-4和a-MHC的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞,探究分化過程中細(xì)胞的形態(tài)變化規(guī)律,探討分化過程中細(xì)胞的形態(tài)變化與GATA-4和a-MHC表達(dá)之間的相關(guān)關(guān)系。方法在全骨髓貼壁培養(yǎng)法的基礎(chǔ)上,在離心管中靜置分層,減少摻雜在培養(yǎng)體系中其他種類的細(xì)胞。對(duì)各代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行成骨和成脂多分化潛能檢測(cè),以監(jiān)測(cè)并建立穩(wěn)定的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系。選用第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,以心肌組織裂解液為條件誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)誘導(dǎo)后細(xì)胞中cTnT和connexin43的表達(dá)情況。倒置顯微鏡下觀察誘導(dǎo)過程中細(xì)胞的形態(tài)變化規(guī)律,結(jié)合心肌細(xì)胞發(fā)生過程中細(xì)胞形態(tài)變化規(guī)律,選定分化過程中5個(gè)特異形態(tài)點(diǎn)做為檢測(cè)時(shí)間點(diǎn),實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中GATA-4和a-MHC mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果1、以心肌組織裂解液持續(xù)誘導(dǎo)BMSCs,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示,當(dāng)誘導(dǎo)至細(xì)胞呈網(wǎng)織樣時(shí),細(xì)胞中cTnT和connexin43開始有微量表達(dá),且隨著誘導(dǎo)過程的延續(xù),細(xì)胞中cTnT和connexin43持續(xù)表達(dá)。2、通過反復(fù)多次的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn),在誘導(dǎo)過程中均可觀察到細(xì)胞形態(tài)規(guī)律性的變化：BMSCs由梭形或圓形逐漸變?yōu)槎虠U狀；短桿狀細(xì)胞形成突起并逐漸增多,細(xì)胞間以突起互相連接成網(wǎng)織樣；短桿狀細(xì)胞之間的連接不斷增多,細(xì)胞之間端端相連,聚集生長(zhǎng)且排列方向趨于一致,呈典型的“竹節(jié)樣”；相鄰的部分細(xì)胞互相融合形成多核肌管樣結(jié)構(gòu)。選定以下五個(gè)細(xì)胞形態(tài)：梭形、短桿狀、網(wǎng)織樣、“竹節(jié)樣”和肌管樣的細(xì)胞為誘導(dǎo)過程中的檢測(cè)點(diǎn)。3、誘導(dǎo)過程5個(gè)檢測(cè)點(diǎn)的細(xì)胞實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示：誘導(dǎo)前梭形細(xì)胞中,GATA-4和a-MHC低表達(dá)；短桿狀細(xì)胞中,GATA-4和a-MHC的表達(dá)都有輕微增加；網(wǎng)織樣細(xì)胞中,GATA-4的表達(dá)明顯增強(qiáng)達(dá)到表達(dá)量高峰,a-MHC表達(dá)量較短桿狀細(xì)胞時(shí)穩(wěn)定增加；“竹節(jié)樣”細(xì)胞中,GATA-4持續(xù)高表達(dá),a-MHC表達(dá)量穩(wěn)定增加；肌管樣細(xì)胞中,GATA-4持續(xù)高表達(dá),a-MHC表達(dá)量明顯增加達(dá)表達(dá)高峰。結(jié)論BMSCs分化為心肌細(xì)胞過程中,細(xì)胞形態(tài)變化具有明顯的規(guī)律特征。隨著誘導(dǎo)過程中細(xì)胞形態(tài)的變化,細(xì)胞中心肌相關(guān)特異蛋白cTnT和connexin43的表達(dá)逐漸發(fā)生變化。心肌相關(guān)基因GATA-4和a-MH C在分化過程中5個(gè)檢測(cè)點(diǎn)呈現(xiàn)出不同的特點(diǎn)。在BMSCs分化為心肌細(xì)胞過程中,細(xì)胞的形態(tài)變化與GATA-4和a-MHC的表達(dá)量變化之間具有一定的對(duì)應(yīng)關(guān)系。通過GATA-4和a-MH C的表達(dá)量的檢測(cè),可初步推斷分化過程中細(xì)胞所處形態(tài),進(jìn)而初步評(píng)估細(xì)胞的分化發(fā)育狀況。
【關(guān)鍵詞】：心肌 定向分化 GATA-4 a-MHC
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 英文縮略詞5-6
• 摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-29
• 結(jié)果29-32
• 討論32-40
• 結(jié)論40-41
• 問題和展望41-42
• 附圖42-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 綜述55-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 致謝65-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 任杰;張乃文;;具有細(xì)胞識(shí)別信號(hào)的組織工程支架材料的研究[J];材料導(dǎo)報(bào);2004年01期

2 張滌生;組織工程學(xué)——現(xiàn)代生物生命科學(xué)的前沿[J];中國(guó)工程科學(xué);2000年10期

3 伍長(zhǎng)學(xué);張爾永;楊思遠(yuǎn);馬建e，

本文編號(hào)：294915