目的探討不同Wnt蛋白對小鼠胚胎肝祖細(xì)胞HP14-19分化的作用,篩選有效的肝干細(xì)胞定向分化體系,為治療肝衰竭提供理論基礎(chǔ)。方法攜帶不同Wnt蛋白基因的19種重組腺病毒,分別感染HP14-19,檢測清蛋白啟動子啟動的熒光素酶報(bào)告基因活性;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測detla蛋白DLK、甲胎蛋白（AFP）、清蛋白（ALB）、上皮特異性標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白（CK18）等肝細(xì)胞分化成熟相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)情況;糖原（PAS）染色實(shí)驗(yàn)和吲哚菁綠（ICG）攝取實(shí)驗(yàn)用于檢測肝細(xì)胞合成代謝功能。結(jié)果 19種Wnt腺病毒均能有效感染HP14-19細(xì)胞并表達(dá)相應(yīng)的Wnt信號蛋白,隨著處理時(shí)間的延長,熒光素酶值逐漸升高,其中Wnt3a的作用最明顯;Ad-Wnt3a組肝干細(xì)胞標(biāo)志DLK、AFP表達(dá)明顯下降;肝細(xì)胞特異性成熟標(biāo)志ALB、CK18明顯上調(diào);Ad-Wnt3a處理后PAS染色可見70%～80%的細(xì)胞染色陽性,細(xì)胞由多角形變?yōu)殚L梭形;ICG攝取實(shí)驗(yàn)可見大量綠色圓形或者多邊形陽性細(xì)胞。結(jié)論 Wnt3a蛋白是誘導(dǎo)HP14-19細(xì)胞成熟分化的重要蛋白,誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞類似于成熟肝細(xì)胞,有較強(qiáng)的合成代謝功能;對進(jìn)一步研究... 

【文章來源】：國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2020年17期

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

不同重組腺病毒對HP14-19細(xì)胞的感染情況（200×）

HP14-19轉(zhuǎn)染后第4、6、9天的ALB-GLuc活性

實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，Ad-Wnt3a組肝干細(xì)胞標(biāo)志DLK、AFP表達(dá)明顯下降；肝細(xì)胞特異性成熟標(biāo)志ALB、CK18明顯上調(diào)（圖3），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。圖4 Ad-Wnt3a處理后HP14-19細(xì)胞PAS染色情況（100×）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Wnt3a:functions and implications in cancer[J]. Sha He,Yi Lu,Xia Liu,Xin Huang,Evan T.Keller,Chao-Nan Qian,Jian Zhang.  Chinese Journal of Cancer. 2015(12)
[2]Wnt/β-catenin信號通路在肝細(xì)胞癌中的促進(jìn)作用[J]. 謝亮海,蔣晗,吳福生.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(06)



本文編號：2935244