目的從新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）患者鼻/咽拭子樣本中分離、培養(yǎng)嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）。方法將來自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子樣本以TPCK胰酶處理,然后接種Vero E6細胞;待大部分細胞出現(xiàn)明顯病變時,取細胞培養(yǎng)上清用qRT-PCR法檢測病毒核酸,并用反轉錄PCR擴增病毒受體結合區(qū)（RBD）基因片段;將病毒擴增培養(yǎng)后感染接種于96孔板中的Vero E6細胞,觀察細胞病變效應,并用免疫熒光法檢測病毒蛋白。結果 2份COVID-19患者鼻/咽拭子樣本接種的Vero E6細胞出現(xiàn)明顯細胞病變效應,細胞培養(yǎng)上清中檢測出新復制產(chǎn)生的SARS-CoV-2核酸,擴增出的RBD序列與早期分離出的SARS-CoV-2相應序列完全一致;病毒感染的Vero E6細胞病變迅速,并能與SARS-CoV-2核衣殼蛋白（N蛋白）單克隆抗體、刺突蛋白（S蛋白）單克隆抗體及COVID-19患者恢復期血清發(fā)生反應。結論從2份COVID-19患者鼻/咽拭子樣本中成功分離出SARS-CoV-2,為后續(xù)開展SARS-CoV-2感染與致病機制研究、防治藥物與疫苗的研發(fā)奠定了... 

【文章來源】：第二軍醫(yī)大學學報. 2020年04期 第365-370頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

免疫熒光檢測SARS-CoV-2蛋白

用反轉錄PCR分別擴增S2、S3株SARS-CoV-2 S基因的RBD區(qū)序列,測序結果如圖4所示,2株病毒的S基因RBD區(qū)序列與最早完成基因組測序的SARS-CoV-2 病毒株(GenBank登錄號:NC＿045512)RBD區(qū)序列一致。圖2 SARS-CoV-2感染的Vero E6細胞的細胞病變效應

SARS-CoV-2感染的Vero E6細胞的細胞病變效應

【參考文獻】：
期刊論文
[1]新型冠狀病毒上海株（nCoV-SH01）的分離和鑒定[J]. 張榮,易志剛,王玉燕,滕崢,徐巍,宋武慧,蔡霞,孫志平,谷陳建,周艷秋,陳洪友,葉榮,韓文東,朱云凱,馮飛,房方皓,李崇山,張曦,瞿滌,付晨,謝幼華,袁正宏.  微生物與感染. 2020(01)
[2]冠狀病毒的致病性及防控[J]. 聞玉梅.  微生物與感染. 2020(01)



本文編號：2900895