目的設計家蠅抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探討其抗白色念珠菌（Candida albicans, Ca）活性及作用機制。方法通過氨基酸替換法設計MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液體稀釋法測定Mt6-21DLeu對Ca的最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MFC）以及不同環(huán)境中Mt6-21DLeu對Ca抑菌活性的變化;通過時間-殺菌曲線反映Mt6-21DLeu對Ca的殺菌動力學;通過結晶紫染色測定Mt6-21DLeu對Ca不同階段生物被膜的清除作用;采用多功能酶標儀檢測熒光探針DPH的相對熒光密度;熒光顯微鏡觀察Mt6-21DLeu的細胞膜通透性;采用流式細胞儀檢測Mt6-21DLeu影響Ca活性氧ROS生成的影響。結果與MAF-1A相比,Mt6-21DLeu抑制Ca生長的效果提高近5倍,其MIC和MFC分別為0.128 mg/ml和0.256 mg/ml。在鹽離子環(huán)境中,Mt6-21DLeu活性幾乎不受影響,胰酶環(huán)境對Mt6-21DLeu有所抑制但遠小于對MAF-1A活性的干擾。時間-殺菌曲線結果顯示在MIC和2 MIC濃度下,Mt6-21DLeu于... 

【文章來源】：中國病原生物學雜志. 2020年07期 第761-767頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

MAF-1A與Mt6-21DLeu的螺旋圖

Time-kill Curve檢測結果見圖2。1 MIC和2 MIC濃度下的Mt6-21DLeu從12 h開始逐漸有抑制Ca生長作用,且隨著培養(yǎng)時間的延長抑制作用更加明顯。4 MIC濃度的Mt6-21DLeu在作用3 h即出現(xiàn)殺菌功效,表明Mt6-21DLeu對Ca的殺菌作用呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。5 生物被膜檢測

膜電位熒光探針1,6-二苯基-1,3,5-乙三烯(1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene,DPH)能在不干擾細胞膜結構的前提下嵌入細胞膜的脂質雙分子層中,其熒光的強弱反映細胞膜的流動性和有序性,即DPH熒光強度的降低提示細胞膜呈較低的結構有序性或較高的流動性[10-11]。圖4A顯示,1、2、4 MIC濃度的Mt6-21DLeu分別作用于Ca后,DPH的相對熒光強度從對照組的(100±6.52)%降至(86.38±17.38)%、(56.50±2.56)%和(54.16±2.64)%,提示Ca的細胞膜結構遭到Mt6-21DLeu破壞。隨著Mt6-21DLeu濃度的提高,能被PI著色的Ca菌體比例增加(圖4B),表明Mt6-21DLeu濃度越高,越容易導致細胞膜的破壞。圖4 Mt6-21DLeu對Ca細胞膜的損傷

【參考文獻】：
期刊論文
[1]家蠅幼蟲血淋巴抗真菌肽MAF-1的分子特性分析及其抗真菌作用[J]. 涂濤田,季恒青,國果,付萍,吳建偉.  昆蟲學報. 2012(09)

博士論文
[1]兩類天然產物的抗真菌活性及作用機制研究[D]. 李穎.山東大學 2016



本文編號：2898862