本文關(guān)鍵詞：尼古丁對大鼠下丘腦室旁核小細胞神經(jīng)元活動的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]下丘腦室旁核(PVN)小細胞神經(jīng)元調(diào)控自主神經(jīng)活動,在心血管功能、神經(jīng)內(nèi)分泌活動及能量代謝調(diào)節(jié)方面起重要作用。在體實驗研究表明,尼古丁可活化PVN神經(jīng)元煙堿樣受體,影響攝食、能量代謝和神經(jīng)內(nèi)分泌功能,然而在離體條件下,活化煙堿樣受體對PVN小細胞神經(jīng)元活動影響機制尚無報道。因此,本研究聯(lián)合應(yīng)用膜片鉗記錄、組織化學(xué)和神經(jīng)藥理學(xué)等技術(shù)手段,在新生大鼠下丘腦切片上觀察尼古丁對大鼠下丘腦小細胞神經(jīng)元自發(fā)性放電和興奮性突觸后電流(sEPSC)活動的影響；研究尼古丁對自發(fā)性活動影響的劑量依存性以及半數(shù)有效濃度；探討PVN內(nèi)尼古丁敏感小細胞神經(jīng)元的組織學(xué)特征；明確尼古丁對PVN小細胞神經(jīng)元的影響機制,有助于闡明尼古丁對心血管及下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌功能活動的調(diào)節(jié)機理。[材料與方法]出生后14-21d的Wistar雄性的大鼠。使用異氟烷深度麻醉后,斷頭取腦,使用萊卡1200S全自動振動切片機制備厚度為250μm、內(nèi)含PVN的下丘腦切片。在室溫下,將下丘腦切片置于充95%02和5%C02混合氣體的人工腦脊液中孵育1h以上。人工腦脊液由以下成分構(gòu)成(in mM)：118 NaCl,3 KCl, 1 MgCl2·6H2O,1 NaH2PO4·2H2O,25 NaHCO3,10 D-Glucose,2 CaCl2; PH:7.3-7.4,滲透壓為295-305 mOsM。記錄電極內(nèi)灌裝10μl內(nèi)液,電極阻抗為4-6 MΩ。聯(lián)合應(yīng)用全細胞膜片鉗、生物素染色和神經(jīng)藥理學(xué)手段研究尼古丁對PVN小細胞神經(jīng)元自發(fā)性放電頻率、膜電位和sEPSCs的影響。PVN神經(jīng)元全細胞膜片鉗記錄是通過Axon-700B膜片鉗放大器、Digidata 1400 A系列數(shù)模轉(zhuǎn)換器、Clampex10.4數(shù)據(jù)包和電腦來實現(xiàn)的,數(shù)據(jù)采集后存于移動硬盤和DVD光盤用于分析,只有記錄完整且基線穩(wěn)定的實驗數(shù)據(jù)用于數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析。實驗結(jié)束后腦片用4%多聚甲醛在室溫下固定24h后,然后置于生物素復(fù)合物中過夜。通過DAB組織化學(xué)檢測生物素分布,顯微鏡下分析記錄細胞的組織學(xué)特征。采用Clampfit10.4軟件對電生理實驗數(shù)據(jù)進行分析,采用SPSS軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析,均數(shù)的比較采用配對T檢驗,P0.05認為有統(tǒng)計學(xué)差異。[結(jié)果](1)PVN小細胞神經(jīng)元胞體平均直徑為12.6±1.10μm,樹突個數(shù)為2-6個；自發(fā)性放電頻率為2.21±0.24 Hz,平均膜電位為-54.7±1.3 mV。(2)在電流鉗記錄模式下,灌流尼古丁(1μM)可使46.6%的PVN小細胞神經(jīng)元產(chǎn)生可逆性膜電位去極化和放電頻率增加。(3)尼古丁對部分PVN小細胞神經(jīng)元自發(fā)性活動的興奮作用具有劑量依存性,半數(shù)有效抑制濃度為13μM。(4)尼古丁可顯著增加尼古丁敏感PVN小細胞神經(jīng)元興奮性突觸電流(EPSCs)的發(fā)生頻率,但對EPSCs振幅影響不大。提示尼古丁誘發(fā)PVN敏感神經(jīng)元興奮可能與其突觸前行為有關(guān)。[結(jié)論]尼古丁興奮PVN煙堿能傳人纖維,導(dǎo)致部分PVN小細胞神經(jīng)元產(chǎn)生膜去極化,增加自發(fā)性放電和sEPSCs頻率。
【關(guān)鍵詞】：尼古丁 下丘腦室旁核 小細胞神經(jīng)元 全細胞膜片鉗記錄 生物素染色 自發(fā)性放電
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R338
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 英文縮寫詞11-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 材料與方法16-19
• 1. 試驗材料16-17
• 1.1 實驗動物及腦片制備16
• 1.2 實驗儀器設(shè)備16
• 1.3 實驗用藥16-17
• 2 實驗方法與步驟17-19
• 2.1 全細胞膜片鉗記錄及生物素染色17
• 2.2 生物素染色17-18
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析18-19
• 第三章 實驗結(jié)果19-25
• 3.1 PVN小細胞神經(jīng)元的電生理與組織學(xué)特征19-20
• 3.2 尼古丁對PVN處小細胞神經(jīng)元自發(fā)性放電活動的影響20-23
• 3.3 尼古丁對PVN敏感小細胞神經(jīng)元興奮性性突觸后電位的影響23-25
• 第四章 討論25-27
• 第五章 結(jié)論27-28
• 參考文獻28-30
• 綜述 尼古丁對神經(jīng)元活動及突觸傳遞的作用30-45
• 1. 尼古丁的理化性質(zhì)30-31
• 2. 尼古丁受體31-32
• 3. 尼古丁對突觸傳遞及遞質(zhì)釋放的影響32-35
• 4. 尼古丁的神經(jīng)保護功能35-37
• 參考文獻37-45
• 致謝45

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 羅蘭,張維寧,鄭元林,吳馥梅;ACTH_(4-9)類似物對小鼠海馬突觸體Ca~(2+)水平的調(diào)節(jié)作用[J];生理學(xué)報;1998年04期

  本文關(guān)鍵詞：尼古丁對大鼠下丘腦室旁核小細胞神經(jīng)元活動的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：289449