為了篩選出免疫原性最佳的基因Ⅰ型乙型腦炎病毒亞單位疫苗候選抗原,將基因Ⅰ型JEVGS株的prMEIII融合基因、polytope復(fù)合表位基因和prMEIII-polytope融合基因分別克隆構(gòu)建到原核表達(dá)載體pET-30a上,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)純化獲得重組蛋白。將制備的重組蛋白免疫小鼠,通過(guò)ELISA監(jiān)測(cè)體液免疫反應(yīng)、通過(guò)噬斑減少中和試驗(yàn)滴定中和抗體滴度、通過(guò)細(xì)胞因子表達(dá)豐度和淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),比較分析制備的乙型腦炎病毒亞單位疫苗候選抗原的免疫原性。結(jié)果表明:獲得的分子量分別為35kDa(prMEIII)、28kDa(polytope復(fù)合表位抗原)和57 kDa (prMEIII-polytope)的重組蛋白均能誘導(dǎo)免疫小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)。與prMEIII-polytope和polytope重組蛋白免疫組相比,prMEIII蛋白可誘導(dǎo)免疫小鼠產(chǎn)生更高的IL-2和IFN-γ表達(dá)豐度和淋巴細(xì)胞增殖水平(P0.05)。prMEIII蛋白免疫小鼠誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體滴度接近于商品化乙腦減毒疫苗SA14-14-2 (P0.05)。上述研究結(jié)果表明,prMEIII重組蛋白可以作為乙型腦炎病毒亞單位疫苗的備選蛋白。
【部分圖文】：

SDS-PAGE結(jié)果顯示，重組prMEIII和prMEIII-polytope蛋白主要以包涵體形式表達(dá)，分子量大小分別約為35 kDa和57 kDa，重組polytope蛋白主要以可溶性形式表達(dá)，分子量大小約為28 kDa，進(jìn)一步經(jīng)鎳柱親和層析純化，獲得了純度較高的重組蛋白(圖2)。純化的prMEIII、polytope和prMEIII-polytope重組蛋白的濃度分別是600μg/mL、800μg/mL和530μg/mL。圖2 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及可溶性分析

重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及可溶性分析

通過(guò)間接ELISA測(cè)定第0、7、14、21、28、35、42天收集的免疫小鼠血清中的特異性抗體。結(jié)果顯示，3種基因重組表達(dá)的蛋白質(zhì)免疫組和減毒疫苗免疫組均可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性抗體,但減毒疫苗SA-14-14-2免疫組誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體水平顯著低于本研究所重組表達(dá)的蛋白免疫組(圖4)。圖4 特異ELISA抗體滴度動(dòng)態(tài)曲線
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