目的:觀察肺炎克雷伯菌夾膜多糖(CPS)對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)β-防御素-3(hBD-3)的影響,并探討其作用機(jī)制。方法:用肺炎克雷伯菌CPS刺激人支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2B。使用實(shí)時(shí)定量PCR和ELISA分別檢測(cè)hBD-3 mRNA和蛋白表達(dá)的影響。測(cè)定CPS處理前后絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)以及c-Jun的磷酸化。采用MAPKs和NF-κB抑制劑或RNA干擾TLR4表達(dá),觀察其在介導(dǎo)hBD-3表達(dá)中的作用。采用染色質(zhì)共沉淀技術(shù)檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子AP-1與hBD-3啟動(dòng)子的結(jié)合情況。結(jié)果:CPS處理細(xì)胞后,hBD-3 mRNA的表達(dá)呈劑量依賴(lài)性升高,ELISA獲得類(lèi)似結(jié)果。CPS能激活MAPKs,采用p38、ERK及NF-κB抑制劑SB203580、PD98059和PDTC處理細(xì)胞后,不影響hBD-3的表達(dá),而JNK抑制劑SP600125處理后,hBD-3分泌明顯降低。CPS可誘導(dǎo)AP-1亞基c-Jun磷酸化及能增強(qiáng)AP-1與hBD-3啟動(dòng)子的結(jié)合。結(jié)論:肺炎克雷伯菌夾膜多糖激活A(yù)P-1誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)β-防御素-3。
【部分圖文】：

mRNA和蛋白 BEAS-2B細(xì)胞給予0.1 μg/ml、1.0 μg/ml和10 μg/ml CPS孵育24 h后,實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組相比,hBD-3 mRNA表達(dá)水平隨之增高,呈一定的濃度依賴(lài)性(圖1A)。此外,培養(yǎng)上清中hBD-3蛋白水平也具有類(lèi)似的趨勢(shì)(圖1B)。這表明肺炎克雷伯菌能誘導(dǎo)BEAS-2B細(xì)胞表達(dá)hBD-3。圖2 沉默TLR4對(duì)CPS誘導(dǎo)hBD-3表達(dá)的影響

沉默TLR4對(duì)CPS誘導(dǎo)hBD-3表達(dá)的影響

MAPKs介導(dǎo)CPS誘導(dǎo)hBD-3分泌
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