發(fā)布時間：2020-10-16 12:24

　　 目的成功制備了卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHV)的細(xì)胞抗原片,并驗證其有效性,為檢測KSHV血清標(biāo)本提供了一種可行的辦法。方法培養(yǎng)了能夠穩(wěn)定表達卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒核相關(guān)抗原(LANA)的BCBL-1細(xì)胞。BCBL-1細(xì)胞是感染過KSHV并且細(xì)胞基因組中包含KSHV基因的細(xì)胞。待細(xì)胞生長活力旺盛且狀態(tài)良好時,收集細(xì)胞并用4%的多聚甲醛固定到預(yù)先處理好的抗原片上,完成封閉、待測血清的孵育和熒光二抗的孵育后,通過免疫熒光顯微鏡觀察檢測結(jié)果。結(jié)果通過免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn),感染過KSHV的患者血清樣本能觀察到熒光標(biāo)記的二抗激發(fā)的熒光,而未感染過KSHV的標(biāo)本則沒有觀察到熒光標(biāo)記的二抗激發(fā)的熒光。結(jié)論成功制備了能用于檢測血清的卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒的細(xì)胞抗原片,為進一步研究卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒的流行病學(xué)提供方法。
【部分圖文】：

圖2 熒光顯微鏡下觀察KSHV陽性與陰性樣本檢測結(jié)果 ×100目前常用于檢測KSHV的血清學(xué)方法為ELISA間接法,用此方法檢測血清有以下幾個優(yōu)點:① 適用于大量樣本的檢測,一塊反應(yīng)板至少可以檢測90余份血清標(biāo)本,一次檢測數(shù)塊反應(yīng)板可完成上百個樣本的檢測;② 成本較低,ELISA中各種試劑、耗材及儀器價格相對較低,儲存方便。但是缺點也是十分明顯的:① 費時,包被抗原需4 ℃過夜,第2天檢測血清樣本時,當(dāng)中各種過程所需的時間至少要6 h;② 檢測過程中溫度求高,在檢測樣本時,除洗滌外,所有的過程均需要在37 ℃的環(huán)境中進行,尤其是在酶和底物反應(yīng)時,溫度對最終的OD值影響較大;③ 洗滌不完全時,容易造成背景值的偏高,進而造成假陽性。采用細(xì)胞抗原片的方法檢測血清樣本也有優(yōu)點:① 檢測時間短,抗原片還可以儲存。制作抗原片只需要1 h,檢測樣本需要3 h,制作完成的抗原片可置于-80 ℃保存,待有樣本檢測時可直接取出使用。② 靈敏度較ELISA法高,只有與陽性標(biāo)本中的抗體結(jié)合的熒光二抗能激發(fā)目的熒光,目的熒光的強弱只與激發(fā)光的強弱相關(guān),不受溫度等因素的影響。但是此種方法也存在不足:① 細(xì)胞生長緩慢,BCBL-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,相對于普通的貼壁細(xì)胞生長周期更長。② 要求避光。因為熒光二抗中的熒光物質(zhì)在白光環(huán)境下容易淬滅,所以孵育二抗和在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果時不可過長時間暴露在白光下,進而造成假陰性。③ 費用相對較高,熒光顯微鏡的成本及維護和酶標(biāo)儀表相比較高,不適用于臨床檢測樣本。

BCBL-1細(xì)胞培養(yǎng)和12孔免疫熒光原位雜交載玻片

表1 合肥市238例普通人群KSHV的感染情況 性別 數(shù)量(例) 陽性數(shù) 感染率(%) 男 148 9 6.1 女 90 9 10.0 合計 238 18 7.6圖3 KSHV陽性標(biāo)本結(jié)果局部放大與細(xì)胞核染色對比
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 汪慧民;駱林;龔鎮(zhèn)奎;;巨細(xì)胞病毒抗原片的制備及其在快速診斷中初步應(yīng)用[J];病毒學(xué)雜志;1986年03期

2 唐博恒;王軍軍;任瑞文;劉建偉;方美玉;;登革病毒共有抗原片段的篩選與鑒定[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2012年05期

3 田克恭,遇秀玲,藺會云,韋毅,饒軍,華吳娜;B病毒抗原片在獼猴B病毒抗體檢測中的應(yīng)用[J];中國實驗動物學(xué)雜志;2002年02期

4 鄭紅,李奇芬,吳純清,李夢東,林曉紅,崔恒苒,崔大敷;人工合成丁型肝炎病毒(HDV)抗原片段初報[J];重慶醫(yī)藥;1992年03期

5 何鵬;張華遠(yuǎn);王佑春;李卓;;1型與4型戊型肝炎病毒ORF2抗原性比較[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2006年03期

6 馬雁冰,孫茂盛,李鴻鈞,唐浩,杜瑞娟,李春宏,張光明,謝天宏,戴長柏;戊型肝炎病毒ORF2 C端抗原片段的表達及其免疫學(xué)特性研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2000年05期

7 李孝權(quán);王鳴;易鴻;劉于飛;莫自耀;黃冰;蔣力云;劉遠(yuǎn);范健文;李釧華;鄧志愛;柴巧學(xué);;非可培養(yǎng)狀態(tài)霍亂弧菌的間接免疫熒光檢測[J];中國公共衛(wèi)生;2005年12期

8 鄭紅;人工合成丁型肝炎病毒(HDV)抗原片段初報[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;1992年03期

9 陳有信,周祖嬚;ABC法在單純皰疹病毒感染檢測中的初步應(yīng)用[J];眼科研究;1991年02期

10 李伯良，陳溥言，馬志勇，楊新穎，楊毅，吳賢福，金由辛，蔡寶祥，王德寶;雞馬立克氏病病毒B抗原片段在大腸桿菌中表達[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報;1994年02期

本文編號：2843252