【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?孤啡肽(nociceptin/orphanin FQ,N/OFQ)是阿片受體樣受體(opioid receptor-like 1 receptor,ORL1,也稱為NOPR)的內(nèi)源性配體,在體內(nèi)廣泛分布。孤啡肽參與調(diào)節(jié)疼痛、攝食、心血管調(diào)節(jié)、應(yīng)激、焦慮和抑郁等生理功能。孤啡肽及其受體廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)中,在空間記憶、恐懼記憶和物體識(shí)別記憶的調(diào)節(jié)中起重要作用。嗅周皮層是調(diào)節(jié)新物體識(shí)別(novel object recognition,NOR)記憶的關(guān)鍵腦區(qū),N/OFQ受體高表達(dá)于嗅周皮層。然而,N/OFQ在嗅周皮層是否參與新物體識(shí)別記憶的調(diào)節(jié)仍然未知。此外,孤啡肽是在哪個(gè)階段(獲取、鞏固及回想)參與新物體識(shí)別記憶的調(diào)控仍然不清楚。因此,本文旨在研究N/OFQ對(duì)新物體識(shí)別記憶獲取、鞏固及回想的影響,并研究其在嗅周皮層是否參與該記憶的調(diào)節(jié)。實(shí)驗(yàn)方法:1對(duì)小鼠進(jìn)行側(cè)腦室或雙側(cè)嗅周皮層埋管手術(shù),并在行為學(xué)實(shí)驗(yàn)后通過HE染色來判斷給藥位置是否正確。2依據(jù)小鼠喜歡探索新鮮事物的特性建立新物體識(shí)別模型,研究N/OFQ給藥小鼠和對(duì)照小鼠在NOR記憶上的差異。3在NOR實(shí)驗(yàn)的三個(gè)階段(訓(xùn)練前、訓(xùn)練后及檢測前)對(duì)小鼠側(cè)腦室注射N/OFQ及對(duì)照液體,研究N/OFQ對(duì)NOR記憶獲取、鞏固和回想的影響。4在NOR實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練前對(duì)小鼠側(cè)腦室注射N/OFQ的拮抗劑Nphe,研究N/OFQ發(fā)揮作用的機(jī)制。5 NOR實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練前在小鼠雙側(cè)嗅周皮層注射N/OFQ(0.1及0.3 nmol/側(cè))及對(duì)照液體,研究N/OFQ在嗅周皮層對(duì)NOR記憶的調(diào)節(jié)機(jī)制。6在小鼠側(cè)腦室和雙側(cè)嗅周皮層中注射N/OFQ后進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn),研究N/OFQ是否會(huì)影響運(yùn)動(dòng)能力從而干擾新物體識(shí)別記憶的結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1 NOR實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練前在小鼠側(cè)腦室注射N/OFQ(0.3及1 nmol)及對(duì)照液體,訓(xùn)練階段中各組小鼠無明顯表現(xiàn)差異,檢測階段中對(duì)照組小鼠的識(shí)別指數(shù)顯著高于N/OFQ給藥組小鼠,且差異性呈劑量依賴性上升。說明訓(xùn)練前在側(cè)腦室注射N/OFQ能夠劑量依懶性的損傷新物體識(shí)別記憶。2 NOR實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練后在小鼠側(cè)腦室側(cè)腦室注射N/OFQ(1及3 nmol)及對(duì)照液體,訓(xùn)練及檢測階段中N/OFQ給藥組小鼠與對(duì)照組小鼠都無明顯表現(xiàn)差異。說明訓(xùn)練后側(cè)腦室注射N/OFQ對(duì)新物體識(shí)別記憶的鞏固階段沒有影響。3 NOR實(shí)驗(yàn)檢測前在小鼠側(cè)腦室注射N/OFQ 1 nmol及對(duì)照液體,訓(xùn)練及檢測階段中N/OFQ給藥組小鼠與對(duì)照組小鼠都無明顯表現(xiàn)差異。說明檢測前側(cè)腦室注射N/OFQ對(duì)新物體識(shí)別記憶的回想階段沒有影響。4提前給予孤啡肽選擇受體拮抗劑Nphe([Nphe1]N/OFQ(1-13)NH2),發(fā)現(xiàn)10nmol的Nphe可以拮抗N/OFQ對(duì)小鼠NOR記憶的損傷。說明N/OFQ是通過激活NOP受體發(fā)揮作用的。5在NOR實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練前在小鼠雙側(cè)嗅周皮層注射N/OFQ(0.1及0.3 nmol/側(cè))及對(duì)照液體,訓(xùn)練階段中各組小鼠無明顯表現(xiàn)差異,檢測階段中對(duì)照組小鼠的識(shí)別指數(shù)顯著高于N/OFQ給藥組小鼠,且差異性呈劑量依賴性上升。說明嗅周皮層對(duì)于N/OFQ削弱NOR記憶發(fā)揮著關(guān)鍵作用。6曠場實(shí)驗(yàn)前在小鼠側(cè)腦室注射N/OFQ(1及3nmol)及對(duì)照液體,檢測過程中發(fā)現(xiàn)1nmol N/OFQ對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)有輕微抑制,3nmol N/OFQ對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)有顯著抑制。在小鼠雙側(cè)嗅周皮層注射N/OFQ(0.3nmol)及對(duì)照液體,檢測過程中發(fā)現(xiàn)0.3nmol N/OFQ對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)無影響。綜合結(jié)果說明,N/OFQ對(duì)NOR記憶的損傷不受其調(diào)控的運(yùn)動(dòng)抑制作用影響。結(jié)論:孤啡肽(N/OFQ)在記憶的獲取階段特異性的損傷新物體識(shí)別記憶,而對(duì)該記憶的鞏固和回想階段無影響,且是通過激活N/OFQ的受體發(fā)揮作用的;嗅周皮層是介導(dǎo)N/OFQ調(diào)節(jié)新物體識(shí)別記憶的關(guān)鍵腦區(qū),N/OFQ在嗅周皮層中會(huì)損害新物體識(shí)別記憶。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R338
【圖文】：

第 1 章 前言2圖1.1.1 孤啡肽的立體結(jié)構(gòu)及序列在遺傳水平上，N/OFQ 是由前孤啡肽原（Prepro-N/OFQ，PPN/OFQ）剪接而成的[6]。PPN/OFQ 基因位于人體第 8 號(hào)染色體的短臂上，與編碼神經(jīng)絲輕鏈（neurofilament-light，NEFL）的基因位點(diǎn)緊緊相鄰，且編碼序列在小鼠、大鼠、牛和人類中高度保守[7]。PPN/OFQ 基因與其他阿片肽前體分子基因具有高度相似的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，因而具有同源性。在 PPN/OFQ 的基因序列中，存在著多個(gè)蛋白水解酶酶切單元

圖1.1.2 N/OFQ受體結(jié)構(gòu)模式圖阿片受體分布不同，N/OFQ 受體廣泛分布于外周器官組織在外周組織中，N/OFQ 受體主要分布在外周神經(jīng)組織、免、輸精管和視網(wǎng)膜等組織與器官中[18,19,20]。通過 RT-PCR 技十二指腸、回腸及結(jié)腸的粘膜下及平滑肌層中也有著 N/O中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，N/OFQ 受體在外周皮層、海馬、杏仁核下丘腦、下丘腦相關(guān)區(qū)域和一些丘腦核團(tuán)中大量存在[18,21,2μ受體）和 DOP（δ受體）表達(dá)的尾狀核中，卻沒有發(fā)現(xiàn)說明 N/OFQ 受體并未遍布所有神經(jīng)回路，而是位于局部的典阿片受體不同的調(diào)節(jié)功能。中樞組胺能神經(jīng)系統(tǒng)起源于著包括脊髓在內(nèi)的所有腦區(qū)，并且能夠廣泛地調(diào)節(jié)各種腦活動(dòng)。中樞組胺能神經(jīng)系統(tǒng)中 N/OFQ 受體的分布如圖 1.1

圖1.1.3 N/OFQ受體在腦內(nèi)中樞組胺能神經(jīng)系統(tǒng)中的分布N/OFQ 受體參與調(diào)節(jié)腺苷酸環(huán)化通路，在內(nèi)向整流 K+通道和電壓門控 Ca2+通道的調(diào)節(jié)中起著重要作用，N/OFQ 參與的信號(hào)傳導(dǎo)通路見圖 1.1.4[25]。在細(xì)胞水平上，N/OFQ 受體能夠負(fù)調(diào)節(jié)腺苷酸環(huán)化酶（adenylate cyclase，AC）的活性，抑制電壓門控 Ca2+通道，激活內(nèi)向整流 K+通道，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生抑制作用，這些過程涉及到的信號(hào)傳導(dǎo)通路和學(xué)習(xí)與記憶有著重要的聯(lián)系。由此可見，N/OFQ 和N/OFQ 受體構(gòu)成了一個(gè)在藥理學(xué)上有別于阿片類藥物的全新神經(jīng)調(diào)節(jié)系統(tǒng)。與其他阿片類藥物相比，N/OFQ-NOP 受體系統(tǒng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中對(duì)記憶調(diào)節(jié)有著重要影響，這使其成為了一個(gè)極具潛力的潛在治療靶點(diǎn)。

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本文編號(hào)：2787530