【摘要】：目的膿毒癥是宿主對(duì)感染的反應(yīng)失調(diào)而出現(xiàn)危及生命的器官功能障礙的臨床綜合征,膿毒癥中重要器官的損傷是其致死的主要原因,尤其是肝臟。然而,膿毒癥性肝損傷的致病機(jī)制迄今尚未闡明,臨床療效亦不理想。既往研究表明,生長分化因子-15(GDF-15)作為一種新的轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)超家族成員,其功能涉及到免疫抑制、抗凋亡和抗炎等方面。GDF-15在發(fā)生心、肝、腎功能衰竭患者中明顯增高,且GDF-15過表達(dá)可保護(hù)腎臟和心臟免受LPS誘導(dǎo)的器官損傷。那么GDF-15是否在膿毒癥性肝損傷中發(fā)揮作用,其作用機(jī)制究竟如何仍待進(jìn)一步探討。本研究中,我們擬通過LPS和D-GalN誘導(dǎo)小鼠膿毒癥性肝損傷建立動(dòng)物模型,從而探討GDF-15是否在內(nèi)毒素性肝損傷中發(fā)揮作用以及其內(nèi)在作用機(jī)制。方法通過對(duì)小鼠腹腔內(nèi)注LPS和D-GalN誘導(dǎo)急性肝損傷模型。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能指標(biāo),HE染色觀察小鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)改變,ELISA法檢測(cè)血清和肝組織中促炎癥因子的水平,硫代巴比妥酸法和四甲基聯(lián)苯胺法檢測(cè)肝組織中氧化損傷標(biāo)志物MDA和MPO水平,從而來分析GDF-15在內(nèi)毒素性肝損傷中的作用。進(jìn)一步對(duì)GDF-15作用機(jī)制的研究中,我們采用免疫熒光染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠肝組織和枯否細(xì)胞中iNOS陽性細(xì)胞比率,熒光定量PCR法檢測(cè)枯否細(xì)胞中iNOS mRNA的表達(dá);ELISA法檢測(cè)小鼠肝組織和枯否細(xì)胞培養(yǎng)上清中COX-2和MCP-1的表達(dá);免疫蛋白印跡法檢測(cè)NF-kB信號(hào)通路分子的表達(dá)。結(jié)果LPS/D-GalN誘導(dǎo)的小鼠表現(xiàn)出明顯肝細(xì)胞損傷和炎癥細(xì)胞在肝組織中的浸潤,肝組織中MDA、MPO和促炎癥因子(IL-6、TNF-α和IL-1β)的水平明顯升高,血清中肝功能指標(biāo)ALT/AST和促炎癥因子水平明顯升高;而GDF-15可以顯著減輕LPS/D-GalN的肝損傷作用和促炎癥因子水平。進(jìn)一步研究中,GDF-15干預(yù)可明顯降低LPS誘導(dǎo)后小鼠肝組織和枯否細(xì)胞中iNOS+巨噬細(xì)胞的比率和iNOS mRNA的表達(dá);另外,巨噬細(xì)胞相關(guān)的促炎癥因子COX-2和MCP-1的表達(dá)亦明顯降低;最后在LPS誘導(dǎo)的枯否細(xì)胞中,GDF-15明顯下調(diào)了枯否細(xì)胞中NF-kBp65、p-TAK1、p50和p-IκBα的蛋白水平表達(dá)。結(jié)論綜上,我們成功地建立了LPS/D-GalN誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠模型,并首次揭示了GDF-15通過下調(diào)促炎癥因子的水平,在LPS誘導(dǎo)的膿毒癥性肝損傷中起到了良好的保護(hù)作用。GDF-15對(duì)膿毒癥性肝損傷的保護(hù)作用可能是通過減少促炎性肝巨噬細(xì)胞的數(shù)量和細(xì)胞的活化來介導(dǎo)的;其分子機(jī)制可能是GDF-15在肝組織中通過阻斷細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子激酶1(TAK1)的磷酸化,從而抑制了下游IκBα-NF-κB信號(hào)通路的活化。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R459.7;R575;R-332
【圖文】：

４４０．７１±６５．３２Ｕ／Ｌ，與正常對(duì)照組（４１．５３±２１．４９和８２．１８±３７．４０Ｕ／Ｌ）比較均明站升逡逑高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ＡＬＴ：邋ｔ＝６．７４１，／？＝０？０００；邋ＡＳＴ：邋ｔ＝１１．００９，；；＝０．０００）（表邋１－２，逡逑圖１－２）。逡逑１１逡逑

邐ＬＰＳ／Ｄ－ＧａｌＮ邋＾邋＾逡逑—■ｐｗｉｉ］邋ｎ逡逑圖１－１邋ＨＥ檢測(cè)建模后肝組織的形態(tài)逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ－１邋Ｈａｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ邋ａｎｄ邋ｅｏｓｉｎ邋（Ｈ＆Ｅ）邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｏｆｌｉｖｅｒｓ逡逑ｐ＜０．０１，邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＰＢＳ邋ｇｒｏｕｐ逡逑１．２．２血清中ＡＬＴ和ＡＳＴ表達(dá)情況逡逑血清ＡＬＴ、ＡＳＴ水平是臨床反映肝細(xì)胞完整性，以及肝損傷和壞死程度的敏逡逑感指標(biāo)，ＬＰＳ／Ｄ－ＧａｌＮ處理組小鼠血清中ＡＬＴ和ＡＳＴ分別為２０７．４５±５４．２５和逡逑４４０．７１±６５．３２Ｕ／Ｌ，與正常對(duì)照組（４１．５３±２１．４９和８２．１８±３７．４０Ｕ／Ｌ）比較均明站升逡逑高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ＡＬＴ：邋ｔ＝６．７４１，／？＝０？０００；邋ＡＳＴ：邋ｔ＝１１．００９，；；＝０．０００）（表邋１－２，逡逑圖１－２）。逡逑１１逡逑

邐＾邋２００－逡逑？邋：邋ｃ／邐�！义蠄D１－２邋ＬＰＳ／Ｄ－ＧａｌＮ誘導(dǎo)對(duì)ＡＬＴ／ＡＳＴ活性的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ－２邋Ｔｈｅ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｉｎ邋ｓｅｒｕｍ邋ＡＳＴ邋ａｎｄ邋ＡＬＴ邋ｉｎ邋ｒｅｓｐｏｎｓｅ邋ｔｏ邋ＬＰＳ／邋Ｄ－ＧａｌＮ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ逡逑＊＊，邋ｐ＜０．０１，邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＰＢＳ邋ｇｒｏｕｐ逡逑１．２．３肝組織中ＭＤＡ和ＭＰＯ的水平逡逑ＭＤＡ含量的高低反映了機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映了機(jī)體細(xì)胞受逡逑自由基攻擊導(dǎo)致細(xì)胞損傷的程度。作為中性粒細(xì)胞標(biāo)志的ＭＰＯ，其活性的高低逡逑亦反映了脂質(zhì)氧化程度，因此ＭＰＯ水平的高低可作為炎癥反應(yīng)損傷的指標(biāo)。逡逑經(jīng)檢測(cè)，結(jié)果顯示僅注射ＰＢＳ的對(duì)照組和ＬＰＳ／Ｄ－ＧａｌＮ誘導(dǎo)組小鼠肝臟組織中逡逑ＭＤＡ邋和邋ＭＰＯ邋的水平分別為：０．８４±０．２２邋和邋３．７５±０．４５邋ｎｍｏｌ／ｍｇ、０．０６士０．０２邋和逡逑１２逡逑

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本文編號(hào)：2782571