【摘要】：目的:建立放射性唾液腺損傷的細胞學(xué)模型,為后期放射性損傷唾液腺的功能修復(fù)實驗研究打下細胞學(xué)基礎(chǔ)。方法:利用組織塊法與酶消化法從新生3d SD大鼠頜下腺中分離頜下腺細胞,通過胰蛋白酶差速脫壁法及傳代純化得到大鼠頜下腺上皮細胞,對其進行培養(yǎng)、傳代;對傳至P2細胞應(yīng)用免疫細胞化學(xué)法進行角蛋白(CK7)鑒定;制備P2代大鼠頜下腺上皮細胞細胞懸液,利用醫(yī)用電子直線加速器對細胞懸液進行不同劑量的照射(0Gy、1Gy、3Gy、5Gy、7Gy、9Gy);通過CCK-8(Cell Counting Kit-8)技術(shù)檢測各照射劑量組細胞增殖活性;使用Annexin V-FITC/PI流式細胞技術(shù)對各照射劑量組細胞凋亡情況進行檢測;通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法測定各組細胞72h后上清液中大鼠唾液淀粉酶α1(AMY1)的含量;使用糖原PAS染色法及免疫細胞化學(xué)法對各組細胞糖原分泌及E-鈣黏蛋白表達能力進行評估比較。結(jié)果:1、原代SD大鼠頜下腺上皮細胞,第6天細胞鏡下呈多角形,鵝卵石樣排列,第14天細胞呈鋪路石樣;2、P2代大鼠頜下腺上皮細胞CK7陽性表達,證明細胞為上皮來源;3、放射后72h各組細胞鏡下可見0Gy與1Gy組細胞無明顯差異,細胞形態(tài)均一,細胞密度約90%;3Gy組細胞形態(tài)均一,細胞密度稍降低;5Gy組細胞密度進一步降低,但細胞形態(tài)尚可;7Gy與9Gy組細胞異形性大,細胞密度大幅度下降,其中9Gy組鏡下極少見貼壁活細胞;4、CCK-8檢測顯示各組細胞在1-7天內(nèi)增殖活性均先增加后降低,細胞的增殖能力隨照射劑量的增加而降低,除0Gy與1Gy組增殖活性無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P㧐0.05)外,剩余組間細胞增殖活性差異均具統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05),其中5Gy組細胞增殖活性降至0Gy組的約53.95%;5、各組細胞流式細胞凋亡檢測結(jié)果可知除0Gy與1Gy組間細胞凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義之外(P0.05),剩余各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中5Gy組細胞凋亡率明顯升高至12.65±0.72%;6、各組細胞上清液中AMY1濃度隨照射劑量的增加而減少,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中5Gy組細胞AMY1濃度降至0Gy組的約59.9%;7、各組細胞糖原染色結(jié)果見0Gy、1Gy組細胞胞質(zhì)內(nèi)均見大量深紅色糖原顆粒,3Gy組細胞胞質(zhì)內(nèi)深紅色糖原顆粒稍減少,5Gy、7Gy兩組細胞胞質(zhì)內(nèi)的紅色糖原顆粒明顯減少且染色變淺,而9Gy組胞胞質(zhì)內(nèi)幾乎無紅色糖原顆粒;8、各組細胞E-Cad免疫細胞化學(xué)結(jié)果可見0Gy、1Gy組細胞胞漿呈深棕褐色,3Gy、5Gy組細胞胞漿棕褐色變淺,7Gy、9Gy組細胞胞漿內(nèi)極少見棕褐色顆粒。結(jié)論:輻射造成大鼠頜下腺上皮細胞損傷且隨輻射劑量的增加,細胞損傷程度加重,而5Gy的X線照射可能為SD大鼠頜下腺上皮細胞放射性損傷細胞學(xué)模型合適照射劑量。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R78;R-332
【圖文】：

醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 曹結(jié)果1 SD 大鼠頜下腺細胞鏡下形態(tài)學(xué)特征原代培養(yǎng)2天后鏡下可見貼壁的上皮細胞，第4天鏡下可見少量成纖維細胞混白酶差速貼壁法去除后可得到形態(tài)均一的 SD 大鼠下頜下腺細胞，第 6 天鏡胞呈多角形，呈鵝卵石樣排列（見圖 1A）；第 14 天時鏡下細胞呈鋪路石樣，可見豐富胞漿及分泌顆粒（見圖 1B）

BBB圖 1.倒置相差顯微鏡下觀察原代 SD 大鼠 SMGCs 形態(tài)A.SD 大鼠 SMGCs 原代培養(yǎng)第 6 天（×200）；B.SD 大鼠 SMGCs 原代培養(yǎng)第 14 天（×400）2 SD 大鼠下頜下腺細胞免疫學(xué)鑒定本實驗以角蛋白（CK7）作為標(biāo)記蛋白。鏡下表現(xiàn)為下頜下腺細胞細胞核及細呈黃棕色染色（圖 2A），CK7 陽性表達，證實細胞為上皮來源，PBS 液作為陰照組（圖 2B）。A

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 曹 璐2.3 SD 大鼠頜下腺細胞放射后各組鏡下形態(tài)學(xué)特征第 2 代 SD 大鼠頜下腺細胞制細胞懸液，分為 6 組，分別給予 0Gy、1Gy、3Gy、5Gy、7Gy 和 9Gy 的 X 線照射，接種至 T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng) 72h 后顯微鏡下觀察，可見 0Gy 組細胞形態(tài)均一，細胞密度約 90%（見圖 3A）；1Gy 組鏡下細胞形態(tài)學(xué)與 0Gy組基本相同（見圖 3B）；3Gy 組細胞形態(tài)較均一，細胞密度約 80%（見圖 3C）；5Gy組細胞形態(tài)尚可，細胞密度進一步降低（見圖 3D）；7Gy 組細胞形態(tài)異形性大，部分細胞由多角形變成類圓形，細胞密度約 40%（見圖 3E）；9Gy 組細胞形態(tài)基本消失，鏡下少見貼壁活細胞（見圖 3F）

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3 鄒道全;自制燒傷Ⅲ號油膏治療放射性損傷療效[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;1989年05期

4 林志彬,張志玲,劉慧人,吳玉成,阮元,蔡志基,叢錚;靈芝的藥理研究——Ⅶ.靈芝液抗放射性損傷作用的初步研究[J];北京醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1979年02期

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6 張玉榮;王建軍;;中藥對于子宮癌放射性損傷的治療作用[J];中國保健營養(yǎng);2012年10期

7 楊志祥;第4講 局部放射性損傷的手術(shù)治療[J];人民軍醫(yī);2000年09期

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9 段宏燕;祝沈冬;于清蕊;;一笑散對直腸放射性損傷的臨床防治效果[J];中國實用內(nèi)科雜志;2007年S1期

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5 李東娟;潘賀葵;周潤嫦;陳幼娥;;高壓氧治療放射性損傷的療效分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國高壓氧醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

6 王綠化;;肺的放射性損傷[A];2007第六屆全國放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

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8 余永強;孟慶勇;;ADC值測量在兔腦立體定向微觀放射性損傷檢測中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第16次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2009年

9 孫堅;何貴金;張申眾;金永柏;曹明洲;姜維國;戴顯偉;;~(103)pd放射性支架持續(xù)照射犬膽管放射性損傷的動物實驗研究[A];中國實驗動物學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

10 周振華;林原;劉魯明;;宮頸癌放療后直腸后期放射性損傷的中醫(yī)治療[A];2010中國醫(yī)師協(xié)會中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師大會摘要集[C];2010年

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8 寧昌;基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細胞修復(fù)小鼠胸腺放射性損傷的研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2012年

9 鄭蕊;周圍神經(jīng)放射性損傷的組織工程化修復(fù)及MRI監(jiān)測[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

10 陳韋;XRCC1 SNP與晚期NSCLC患者放療療效的關(guān)系[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2014年

本文編號：2770272