發(fā)布時(shí)間：2020-06-27 19:45

【摘要】：研究背景:肌腱病是一種臨床常見疾病,主要患病人群是運(yùn)動(dòng)員及平時(shí)運(yùn)動(dòng)少的中年人。目前的一些體外研究表明,不同的制備方式制成的PRP(Platelet-Rich Plasma,富血小板血漿)制品中存在細(xì)胞成分的差異:如白細(xì)胞,血小板以及纖維蛋白原,尤其是白細(xì)胞含量的差異,可能就是PRP對(duì)肌腱病臨床療效不確切的主要原因之一。但是目前尚沒有關(guān)于在體內(nèi)肌腱病環(huán)境下PRP中白細(xì)胞的影響的相關(guān)研究。PRP對(duì)肌腱病治療中,白細(xì)胞成分發(fā)揮影響的具體機(jī)制也尚不明確。研究方法:兔跟腱局部注射膠原酶4周建立肌腱病動(dòng)物模型后被隨機(jī)分成3組,分別用(1)200 μLLp-PRP(Leukocyte-Poor PRP,去白細(xì)胞的富血小板血漿)(n=8),(2)200 μL Lr-PRP(Leukocyte-Rich PRP,富白細(xì)胞的富血小板血漿)(n = 8),以及(3)200 μL 生理鹽水(n = 8)對(duì)損傷跟腱局部進(jìn)行注射治療。治療完成4周后,采集治療的跟腱組織,通過(guò)MRI掃描,HE及Masson染色,組織學(xué)評(píng)估,TEM(TransmissionElectron Microscopy,透射電子顯微鏡)掃描等方法對(duì)治療結(jié)果進(jìn)行評(píng)估,采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析Lp-PRP組,Lr-PRP組和對(duì)照組之間治療結(jié)果的差異。并使用Elisa對(duì)肌腱組織中IL-1β,TNF-α及IL-6細(xì)胞因子進(jìn)行定量分析,使用RT-PCR測(cè)定肌腱組織中MMP-1,3,9及TIMP基因表達(dá)水平來(lái)初步探究白細(xì)胞在PRP治療肌腱病過(guò)程中發(fā)揮影響時(shí)與細(xì)胞因子及相關(guān)基因表達(dá)的聯(lián)系。研究結(jié)果:跟腱組織MRI掃描結(jié)果顯示在T2加權(quán)圖像上,Lr-PRP組和對(duì)照組的平均信號(hào)強(qiáng)度顯著高于Lp-PRP組。HE及Masson染色的組織學(xué)結(jié)果顯示Lp-PRP組的炎癥評(píng)分,細(xì)胞密度評(píng)分及總評(píng)分均顯著優(yōu)于Lr-PRP組(P=0.001)和對(duì)照組(P0.001)。TEM掃描結(jié)果顯示Lp-PRP組的膠原纖維直徑相比于Lr-PRP組更大(P0.001),Lp-PRP組的膠原纖維密度顯著低于Lr-PRP組(P0.001)。Elisa實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Lp-PRP組的IL-6水平顯著低于Lr-PRP組(P=0.001)和對(duì)照組(P=0.21)。RT-PCR結(jié)果顯示Lp-PRP組Ⅰ型膠原基因的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P=0.004),但與Lr-PRP組無(wú)顯著差異。Lp-PRP組和Lr-PRP組的MMP-1和MMP-3基因的表達(dá)量均顯著低于對(duì)照組,但只有Lp-PRP組的TIMP-1基因表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P=0.024)。研究結(jié)論:相比于Lr-PRP,Lp-PRP更能促進(jìn)肌腱病中肌腱的修復(fù),是臨床治療肌腱病的更優(yōu)選擇。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R686.1;R-332
【圖文】：

圖１．邋Ｌｐ－ＰＲＰ及Ｌｒ－ＰＲＰ制備流程示意圖逡逑１．２．２．２實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì)及肌腱病動(dòng)物模型制作逡逑１．分組。本實(shí)驗(yàn)共使用３１只體重在２．５－３千克之間的新西蘭大白兔，其中隨機(jī)取逡逑４只兔子作為正常組，不做任何處理，其余２７只兔子將進(jìn)行造摸處理。逡逑２．造摸。使用５ｍｌ注射器將２ｍｌ／ｋｇ的１０％水合氯醛緩慢注射入兔耳緣靜脈內(nèi)進(jìn)逡逑行靜脈麻醉，麻醉完成后使用剃毛器將兔子左側(cè)足跟附近兔毛剃凈，并使用５％聚逡逑維酮碘溶液對(duì)預(yù)注射部位附近進(jìn)行消毒。注射時(shí)使用２９ｇ針頭在跟骨上方５＿處逡逑進(jìn)針，針頭刺入跟腱后再沿著跟腱長(zhǎng)軸緩慢進(jìn)針約１0＿。然后一邊將針頭緩慢從逡逑跟腱中退出，一邊將Ｉ型膠原酶注入跟腱中，每只兔子注射３００ＵＩ膠原酶［４１］。注逡逑射膠原酶４周后，造模即完成。此時(shí)從２７只兔子中隨機(jī)選取３只兔子，于耳緣靜逡逑脈注射２０ｍｌ空氣進(jìn)行安樂死后，采集左側(cè)跟腱組織進(jìn)行ＨＥ染色，以驗(yàn)證造模是逡逑否成功。逡逑

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文邐第一部分逡逑式在左側(cè)跟腱中注射（１）邋０．２ｍＬ邋的邋Ｌｐ－ＰＲＰ，邋（２）邋０．２ｍＬ邋的邋Ｌｒ－ＰＲＰ，（３）邋０．２ｍＬ逡逑的生理鹽水［４１］。ＰＲＰ治療４周后，實(shí)驗(yàn)兔子將被安樂死并取出左側(cè)跟腱組織進(jìn)行逡逑后續(xù)實(shí)驗(yàn)。逡逑

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本文編號(hào)：2732021