【摘要】：大鼠的胰腺是一種類似脂肪質(zhì)地、內(nèi)部呈網(wǎng)狀、但其顏色較脂肪淡、位于腹腔深處的腺體器官。在腹腔中,胰腺位于肝下方,與胃、十二指腸以及脾相連,其上有豐富的血管網(wǎng)絡(luò),胰腺外有間質(zhì)細胞形成的包膜,包膜將胰腺分割成胰腺小葉。胰腺小葉主要由腺泡、導(dǎo)管和胰島組成。其中泡心細胞存在的腺泡腔由單層腺泡細胞圍成,形成大小不等的腔隙,同時,腔隙也存在于胰島細胞與相鄰的腺泡細胞之間,胰島細胞間小管存在于胰島細胞之間。被包膜包裹著的胰島細胞主要包括4種細胞,其中胰島β細胞主要分泌胰島素。另外,胰腺組織中也有成纖維細胞和較為豐富的毛細血管。胰腺大體上可以被劃分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分,外分泌腺主要產(chǎn)生胰液,包含多種消化酶,分泌后的胰液從胰管流入十二指腸;內(nèi)分泌腺主要是由幾種細胞構(gòu)成的胰島,分泌兩種動態(tài)調(diào)節(jié)血糖變化水平的激素。研究已經(jīng)證實糖尿病主要是由胰島內(nèi)分泌功能紊亂而引起的,而消化系統(tǒng)疾病則是由胰腺外分泌的功能失調(diào)而致。因此,通過成熟有效的胰島分離提取方法得到大量具有生物學(xué)活性的胰島,并通過胰島移植來達到救治糖尿病病人的目的顯得格外重要。在動物模型中應(yīng)用膽管灌注法分離提取胰島較傳統(tǒng)的方法來說,具有高效率和高活性的優(yōu)點,但是其操作較傳統(tǒng)的胰島提取方法更繁瑣和復(fù)雜。近年來,不少課題組在分離提取操作上做了一些改進,并對分離提取的胰島冷凍保存進行了嘗試,為后續(xù)對糖尿病患者胰島移植的研究奠定了實驗基礎(chǔ)。本論文中,我們借鑒已有的膽管灌注分離胰島的方法,在此基礎(chǔ)上對結(jié)扎處進行改良,將近十二指腸處的結(jié)扎改為膽管和胰管開口附近兩端十二指腸上結(jié)扎,最大程度的保留胰管運送膠原酶,從大鼠胰腺組織中分離提取胰島細胞,并利用胰島特異染色法鑒定所分離的胰島細胞的完整度。本實驗中,以Wistar雄性大鼠作為實驗對象,選擇0.2%V型膠原酶,酶濃度相對于現(xiàn)有報道較高,采取傳統(tǒng)的剪切法和經(jīng)過上述改良的膽管灌注法分離提取胰島后,利用二乙酸熒光素(Fluorescein diacetate,FDA)/碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色方法檢測和比較兩種方法提取的細胞存活率。通過實驗發(fā)現(xiàn)膽管灌注法提取的胰島細胞半小時內(nèi)的活性明顯高于剪切法提取的胰島細胞活性。另外,對分離提取的胰島細胞分別用低糖和高糖刺激,利用ELISA檢測胰島素的分泌,結(jié)果顯示,與剪切法相比,改良后的膽管灌注分離得到的胰島細胞可以對高濃度葡萄糖刺激產(chǎn)生正常應(yīng)激反應(yīng)而分泌胰島素,說明分離提取后的胰島細胞仍保持正常的胰島分泌功能。再次,我們對兩種不同方法分離提取的胰島細胞在顯微鏡下進行觀察發(fā)現(xiàn),利用改良的膽管灌注法提取的胰島,其包膜破碎的現(xiàn)象較少。最后,我們利用RT-q PCR方法通過檢測膽管灌注法分離提取的胰島分泌蛋白質(zhì)激素的m RNA水平來評估胰島的活性和功能。綜上,本實驗的研究結(jié)果證明利用我們改良的膽管灌注法提取的胰島細胞活性和分泌功能較剪切法更為有效。本研究將為后續(xù)臨床研究糖尿病治療奠定了實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1.1 人的胰腺結(jié)構(gòu)剖析圖胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩大部分。外分泌腺主要產(chǎn)生胰液，即多種，分泌后的胰液從胰管流入十二指腸。胰腺的內(nèi)分泌腺細胞團被包膜包是由胰島細胞組成[2]。胰島大概占總胰腺質(zhì)量的 1-2％，其主要功能是通胰島素和胰高血糖素，參與調(diào)節(jié)碳水化合物，脂質(zhì)和蛋白質(zhì)來源的各種營的儲存和利用[3]。胰島細胞主要分為胰島 α 細胞和胰島 β 細胞。兩種細胞在不同種屬胰島布有所區(qū)別。如，在小鼠和其他嚙齒動物的胰島核心部分主要被β細胞所而α細胞聚集在外圍區(qū)域[5,6]。而在人類和其他靈長類胰島中，α細胞并于外圍，可以分布在胰島的不同位置[7]。在狗和豬胰島中，β細胞和α細

第 1 章 緒論各半分布，而在猴子的胰島中，α細胞不規(guī)則的在內(nèi)部核心處散在出現(xiàn)[島的β細胞主要聚集在中心核和初級內(nèi)分泌細胞中，而α細胞占據(jù)胰島，但在該區(qū)域也能觀察到β細胞。胰島中還有一種細胞叫 pp 細胞，主胰島邊緣，偶爾會擴散到胰島的內(nèi)部，但是，大多數(shù) pp 細胞集中在胰區(qū)域[10,11]。大鼠的胰腺是脂肪質(zhì)地、網(wǎng)狀、顏色較脂肪淡但密度較脂肪大的組織，腹部肝下方，與胃、十二指腸以及脾相連，，其上有豐富的血管網(wǎng)絡(luò)[12]。間質(zhì)細胞形成的包膜，其將胰腺分割成胰腺小葉，胰腺小葉由腺泡、導(dǎo)組成。如圖 1.2 所示，胰島細胞主要包括α細胞、β細胞（朗格漢斯胰島胞和 pp 細胞等[13,14]。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.1;R-332

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本文編號：2699706