本文關(guān)鍵詞：酸性環(huán)境對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cell, MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,因能分化為間質(zhì)組織而得名,在特定的體內(nèi)外環(huán)境下,能夠誘導(dǎo)分化成為多種組織細(xì)胞。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell, HUMSCs)來(lái)源于新生兒臍帶華通氏膠,取材方便,來(lái)源廣泛、不受倫理限制、免疫原性低、體外增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn),因此,HUMSCs作為細(xì)胞治療中的種子細(xì)胞成為近年來(lái)再生醫(yī)學(xué),細(xì)胞移植及癌癥治療的研究熱點(diǎn)。研究表明在局部缺血和炎癥環(huán)境中,如呼吸道過敏性哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤微環(huán)境等,由于低氧誘導(dǎo)發(fā)生無(wú)氧糖酵解,導(dǎo)致乳酸積累,進(jìn)而引起胞外環(huán)境的酸化,不利于正常組織細(xì)胞生存。而HUMSCs作為種子細(xì)胞用于細(xì)胞治療的機(jī)理尚未有相關(guān)報(bào)道,本研究選用HUMSCs為細(xì)胞模型,體外模擬病理性酸性環(huán)境,探討酸性環(huán)境對(duì)HUMSCs的存活與遷移能力的影響,同時(shí)初步研究HUMSCs在酸性條件下的細(xì)胞應(yīng)答機(jī)制。方法：采用“爬片”分離獲得HUMSCs;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HUMSCs的表面標(biāo)記物；Real-time PC R檢測(cè)HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體(TDAG8,GPR4, OGR1和G2A)的表達(dá)；Real-time PCR檢測(cè)酸性條件刺激下HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體(TDAG8,GPR4,OGR1口G2A)的表達(dá)；MTT法檢測(cè)HUMSCs在酸性條件下的存活能力；Micro Chemotaxis Chamber法檢測(cè)HUMSCs在酸性條件下的遷移能力。結(jié)果：利用爬片法成功分離培養(yǎng)獲得HUMSCs,流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示HUMSCs高表達(dá)CD105、CD90、CD73、CD29,低表達(dá)CD45、CD34 和 HLA-DR。 Real Time PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HUMSCs細(xì)胞中GPR4受體的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其它幾個(gè)受體(P口0.01)。其次是TDAG8和OGR1受體的表達(dá)量(TDAG8OGR1), G2A幾乎不表達(dá)。Real Time PC R檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TDAG8在pH6.8時(shí)高表達(dá)；MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示在pH6.8、pH7.2、pH7.6條件下,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞存活率沒有顯著性；Micro Chemotaxis Chamber法檢測(cè)pH6.8刺激HUMSCs促進(jìn)細(xì)胞遷移。結(jié)論：在酸性環(huán)境中人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞高表達(dá)質(zhì)子感知受體TDAG8,并且在酸性環(huán)境中,HUMSCs可以存活,即人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能夠適應(yīng)酸性環(huán)境,同時(shí)酸性刺激促進(jìn)HUMSCs遷移。該研究首次探討了酸性環(huán)境對(duì)HUMSCs存活與轉(zhuǎn)移的影響,為后續(xù)深入研究HUMSCs作為種子細(xì)胞用于細(xì)胞治療機(jī)制提供了一定的基礎(chǔ)理論研究。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 酸性環(huán)境 質(zhì)子感知受體 存活 遷移
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-11
• 英文縮略詞表11-12
• 一 前言12-14
• 二 材料與方法14-25
• 2.1 主要試劑及實(shí)驗(yàn)材料14
• 2.2 主要儀器設(shè)備14-15
• 2.3 常用溶液的配置15-16
• 2.4 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUMSCs)的分離培養(yǎng)16-18
• 2.4.1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUMSCs)的分離16
• 2.4.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUMSCs)的傳代16-17
• 2.4.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUMSCs)的凍存17-18
• 2.4.4 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUMSCs)的復(fù)蘇18
• 2.5 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性鑒定18-23
• 2.5.1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察18
• 2.5.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作18
• 2.5.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的制作18-19
• 2.5.4 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物的鑒定19
• 2.5.5 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞總RNA的提取19-20
• 2.5.6 總RNA中的基因DNA的去除20
• 2.5.7 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞cDNA的獲得20-21
• 2.5.8 Real Time PCR檢測(cè)HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體mRNA的表達(dá)量21-23
• 2.6 MTT法檢測(cè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在酸性條件下的存活能力23
• 2.7 Micro Chemotaxis Chamber檢測(cè)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在酸性條件下的遷移能力23-25
• 三 結(jié)果與分析25-32
• 3.1 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察25-26
• 3.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制26
• 3.3 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制26-27
• 3.4 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物鑒定27-28
• 3.5 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中質(zhì)子感知受體mRNA的表達(dá)28-30
• 3.6 不同pH刺激后細(xì)胞內(nèi)質(zhì)子感知受體mRNA的表達(dá)量30-31
• 3.7 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在酸性條件下的存活能力31
• 3.8 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在酸性條件下的遷移能力31-32
• 四 討論32-33
• 五 結(jié)論33-34
• 文獻(xiàn)綜述34-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 致謝45

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  本文關(guān)鍵詞：酸性環(huán)境對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：269255