【摘要】：目的:探討白紋伊蚊雌蚊特異性唾液重組蛋白34k2(rAlb-34k2)對(duì)多種細(xì)菌粘附效應(yīng)的影響,以及與DENV-2的多種靶細(xì)胞粘附效應(yīng)的功能初探。方法:(1)利用免疫印跡法檢測(cè)大腸桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、乙型溶血性鏈球菌、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌與rAlb-34k2蛋白共孵育后的粘附效應(yīng);利用分光光度法檢測(cè)rAlb-34k2蛋白對(duì)16h內(nèi)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的OD_(600)值的變化。(2)利用間接免疫熒光法檢測(cè)rAlb-34k2蛋白對(duì)DENV-2早期感染BHK-21細(xì)胞的影響;利用免疫印跡、間接免疫熒光法檢測(cè)rAlb-34k2蛋白與BHK-21、U87、Raw264.7、HaCat細(xì)胞的粘附效應(yīng)以及抗體阻斷的作用。結(jié)果:(1)rAlb-34k2對(duì)多種細(xì)菌粘附效應(yīng)的初探:①rAlb-34k2蛋白可與大腸桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌粘附,而不能與乙型溶血性鏈球菌粘附;②不同濃度rAlb-34k2蛋白(137 ng/μL、112 ng/μL)干預(yù)大腸桿菌后24h內(nèi)細(xì)菌的OD_(600)值分別波動(dòng)在0.063~0.294和0.097~0.349之間,與PBS對(duì)照組相比,平均抑制率分別為68.7%,66.4%(n=5),且與Ca~(2+)的存在無(wú)關(guān)。而在Ca~(2+)依賴下相應(yīng)濃度的rAlb-CTL2蛋白具有促進(jìn)大腸桿菌OD_(600)升高的效應(yīng),平均促進(jìn)率分別為30.4%,50.3%(n=5)。③以PBS、BSA為對(duì)照,rAlb-34k2蛋白(終濃度為48 ng/μL)作用于金黃色葡萄球菌后16 h內(nèi)細(xì)菌的OD_(600)值波動(dòng)在0.064~1.504之間,與PBS對(duì)照組相比,平均促進(jìn)率為136%,提示該蛋白具有可能一定的促金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的可能(OD_(600))。(2)rAlb-34k2對(duì)DENV-2多種靶細(xì)胞粘附作用的初探:① rAlb-34k2蛋白干擾后,DENV-2感染BHK-21細(xì)胞24h內(nèi)的感染比值分別為:rAlb-34k2蛋白組為0.54±0.029;熱滅活rAlb-34k2蛋白組為0.40±0.023;DENV-2對(duì)照組為0.44±0.03。在蛋白水平表明rAlb-34k2蛋白在早期能促進(jìn)DENV-2感染BHK-21細(xì)胞(n=13,P0.001);②免疫印跡法顯示不同濃度的rAlb-34k2蛋白對(duì)BHK-21細(xì)胞有明顯的粘附效應(yīng),且該效應(yīng)不被抗rAlb-34k2特異性抗血清預(yù)處理后所阻斷;進(jìn)一步通過(guò)免疫印跡和免疫熒光法證實(shí)rAlb-34k2蛋白還可識(shí)別U87、Raw264.7及HaCat等細(xì)胞。結(jié)論:白紋伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白可通過(guò)粘附多種細(xì)菌;同時(shí)該蛋白也可與DENV-2的多種靶細(xì)胞結(jié)合。
【圖文】：

注：1.菌體沉淀組；2.蛋白對(duì)照組；3.PBS末次洗脫液；4.7%SDS上清液圖 1 rAlb-34k2 蛋白與不同細(xì)菌粘附的 Western blot 檢測(cè)結(jié)果Fig.1 The rAlb-34k2 protein binding to different bacteria was analyzed by

圖 2 大腸桿菌OD60016h的分光光度法檢測(cè)結(jié)果Fig.2The OD600value of E. coli was detected by Spectrophotometric2.2.2 不同濃度的 rAlb-34k2 蛋白作用后大腸桿菌 OD600值降低圖 3 表示用分光光度計(jì)法檢測(cè) 16 ng/μL~137 ng/μL 不同濃度的 rAlb
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2690231