【摘要】：多房棘球絳蟲(chóng)(Echinococcus multilocularis)中絳期幼蟲(chóng)(泡狀棘球蚴)在人體內(nèi)以類似腫瘤的方式持續(xù)地增殖發(fā)育,引發(fā)嚴(yán)重的人獸共患泡狀棘球蚴病(Alveolar echinococcosis)。泡狀棘球蚴體內(nèi)始終保有一定數(shù)量的成體干細(xì)胞——生發(fā)細(xì)胞,生發(fā)細(xì)胞的維持對(duì)泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)的生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)介導(dǎo)的EGFR信號(hào)通路是干細(xì)胞維持及干細(xì)胞功能調(diào)控的重要通路之一,在進(jìn)化上具有高度的保守性。本文中主要利用DAPI染色、EdU染色、TUNEL染色、caspase3酶活測(cè)定、掃描電鏡觀察、透射電鏡觀察等技術(shù),從以下三個(gè)方面探究了 EGFR信號(hào)通路在泡狀棘球蚴生發(fā)細(xì)胞維持中的機(jī)制:(1)抑制EGFR信號(hào)通路能誘導(dǎo)泡狀棘球蚴細(xì)胞發(fā)生凋亡。泡狀棘球蚴細(xì)胞出現(xiàn)凋亡小體,總蛋白中caspase3酶活顯著提高,生發(fā)層細(xì)胞從角皮層脫落,生發(fā)層出現(xiàn)損害。(2)抑制EGFR信號(hào)通路能誘導(dǎo)泡狀棘球蚴生發(fā)細(xì)胞凋亡。EGFR抑制劑BIBW2992與生發(fā)細(xì)胞凋亡有濃度梯度效應(yīng)關(guān)系,抑制EGFR信號(hào)通路可導(dǎo)致生發(fā)細(xì)胞減少。(3)EGFR下游的PI3K/AKT信號(hào)通路可能參與了BIBW2992誘導(dǎo)的泡狀棘球蚴細(xì)胞凋亡,而MAPK/ERK信號(hào)通路和mTOR在這一過(guò)程中并未發(fā)揮重要作用。本課題組之前的研究表明EGFR信號(hào)通路參與調(diào)控泡狀棘球蚴生發(fā)細(xì)胞的增殖和自我更新,本論文研究表明EGFR信號(hào)通路同時(shí)還參與維持生發(fā)細(xì)胞存活。因而EGFR信號(hào)通路通過(guò)這兩方面協(xié)同調(diào)控生發(fā)細(xì)胞功能和維持生發(fā)細(xì)胞的細(xì)胞群數(shù)量,繼而影響泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)的生長(zhǎng)發(fā)育。本研究對(duì)EGFR信號(hào)通路在生發(fā)細(xì)胞功能調(diào)控和維持以及泡狀棘球蚴生長(zhǎng)發(fā)育中的作用進(jìn)行了進(jìn)一步深入研究,有助于深入理解泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)制,同時(shí)為今后治療泡狀棘球蚴病的新型藥物研發(fā)奠定了一定理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

Ｆｉｇｕｒｅ２．３邋Ｔｈｅ邋ｐｏｒｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ａｐｏｐｔｏｔｉｃ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋ｔｏｔａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋Ｅ．邋ｍｕｌｔｉｌｏｃｎｌａｒｉｓｉｓ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｏｆ逡逑ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＢＩＢ邋Ｗ２９９２逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號(hào)通路后，ＤＡＰＩ染色顯示（如圖２．２），逡逑和對(duì)照組相比，３個(gè)實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)類似凋亡的現(xiàn)象，如出現(xiàn)凋亡小體（如圖２．２Ｂ，逡逑圖２．２Ｃ，圖２．２Ｄ中白色箭頭所示），說(shuō)明泡狀棘球蚴細(xì)胞可能出現(xiàn)凋亡。逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號(hào)通路后，統(tǒng)計(jì)凋亡細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞逡逑總數(shù)，并且計(jì)算凋亡細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比，結(jié)果顯示（如圖２．３），對(duì)照組逡逑凋亡細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比例為０．９９％±０．３４°／0，２００ｎＭＢＩＢＷ２９９２處理組，比例逡逑為邋１．１１％邋±邋０．３８％，，５００邋ｎＭ邋ＢＩＢＷ２９９２邋處理組比例為邋１．５０％邋±邋０．６６％，２ｐＭ逡逑ＢＩＢＷ２９９２處理組比例為１．９２％±０．９０％，隨著ＢｍＷ２９９２濃度的上升，泡狀棘逡逑球蚴凋亡細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的比例也上升。逡逑該實(shí)驗(yàn)說(shuō)明抑制ＥＧＦＲ信號(hào)通路后泡狀棘球蚴細(xì)胞可能出現(xiàn)凋亡。逡逑２．１．２．２不同時(shí)間相同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號(hào)通路對(duì)泡狀棘球蚴凋亡逡逑的影響逡逑用相同濃度（２邋＾Ｍ）邋ＢＩＢＷ２９９２分別處理泡狀棘球蝴２天和７天

邐ＩＩ逡逑Ｋ１５邋１邐N邐ＩＩ邐■逡逑｜邋ｉ邐ｉ邐１１逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ邋２００邋ｎＭ邋ａｆａｔｉｎｉｂ邋５００邋ｎＭ邋ａｆａｔｉｎｉｂ邋２邋ｕＭ邋ａｆａｔｉｎｉｂ逡逑圖２．３不同濃度ＢＩＢＷ２９９２處理后凋亡細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)比例逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２．３邋Ｔｈｅ邋ｐｏｒｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ａｐｏｐｔｏｔｉｃ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋ｔｏｔａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｉｎ邋Ｅ．邋ｍｕｌｔｉｌｏｃｎｌａｒｉｓｉｓ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｅ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｏｆ逡逑ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＢＩＢ邋Ｗ２９９２逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號(hào)通路后，ＤＡＰＩ染色顯示（如圖２．２），逡逑和對(duì)照組相比，３個(gè)實(shí)驗(yàn)組出現(xiàn)類似凋亡的現(xiàn)象，如出現(xiàn)凋亡小體（如圖２．２Ｂ，逡逑圖２．２Ｃ，圖２．２Ｄ中白色箭頭所示），說(shuō)明泡狀棘球蚴細(xì)胞可能出現(xiàn)凋亡。逡逑不同濃度的ＢＩＢＷ２９９２抑制ＥＧＦＲ信號(hào)通路后，統(tǒng)計(jì)凋亡細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞逡逑總數(shù)，并且計(jì)算凋亡細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比，結(jié)果顯示（如圖２．３），對(duì)照組逡逑凋亡細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比例為０．９９％±０．３４°／0，２００ｎＭＢＩＢＷ２９９２處理組，比例逡逑為邋１．１１％邋±邋０．３８％，５００邋ｎＭ邋ＢＩＢＷ２９９２邋處理組比例為邋１．５０％邋±邋０．６６％，２ｐＭ逡逑ＢＩＢＷ２９９２處理組比例為１．９２％±０．９０％
【學(xué)位授予單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R383.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2682015