【摘要】：背景:體細(xì)胞重編程技術(shù)極大地促進(jìn)了再生醫(yī)學(xué)研究的發(fā)展,包括核移植和細(xì)胞融合,還有獲得2012年諾貝爾獎(jiǎng)的病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)重編程等方式,但是這些誘導(dǎo)方式存在著各種技術(shù)問題與潛在的安全問題,如操作方法復(fù)雜,誘導(dǎo)效率低,外源基因插入以及病毒重新激活等,這些都嚴(yán)重限制了體細(xì)胞重編程技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展與應(yīng)用。與上述體細(xì)胞重編程方法相比,小分子化合物誘導(dǎo)體細(xì)胞重編程擁有諸多優(yōu)勢(shì),如原料容易合成與儲(chǔ)備,作用可逆,誘導(dǎo)可以標(biāo)準(zhǔn)化控制,應(yīng)用更為安全等。小分子化合物誘導(dǎo)獲得的多能性干細(xì)胞(Chemically induced pluripotent stem cells,CiPS)可以避免病毒及轉(zhuǎn)錄因子給細(xì)胞帶來的安全問題,更有利于走向臨床的應(yīng)用。目的:基于前期我們已經(jīng)成功開發(fā)了一種操作簡(jiǎn)便、誘導(dǎo)過程條件均勻、所有成分明確、標(biāo)準(zhǔn)化的小分子化合物誘導(dǎo)方法,驗(yàn)證重編程起始細(xì)胞確為小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs),進(jìn)一步研究小分子化合物重編程機(jī)制。方法:本研究使用轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建FSP-tdTomato熒光蛋白追蹤的成纖維細(xì)胞進(jìn)行小分子化合物誘導(dǎo)重編程,獲取了FSP-tdTomato的CiPS細(xì)胞系,并通過形態(tài)學(xué)分析,多能性基因mRNA、蛋白質(zhì)的表達(dá)情況以及畸胎瘤實(shí)驗(yàn)等對(duì)其多能性進(jìn)行鑒定。結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,小分子化合物處理tdTomato-MEFs 40天之后,出現(xiàn)核仁明顯、核質(zhì)比高、細(xì)胞呈圓形、團(tuán)塊狀聚集的細(xì)胞克隆,并且高表達(dá)多能性基因,體內(nèi)可分化為三個(gè)胚層組織。結(jié)論:以上結(jié)果表明tdTomato-MEFs可用于小分子化合物重編程為CiPSCs,并且具有與小鼠胚胎干細(xì)胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)類似的多能性。該熒光蛋白追蹤細(xì)胞系的建立將有利于小分子化合物重編程機(jī)制的進(jìn)一步研究,并且該細(xì)胞系的進(jìn)一步分化仍能保持熒光蛋白持續(xù)表達(dá),可用于CiPSCs來源功能性細(xì)胞的移植追蹤等研究。
【圖文】：

華南理工大學(xué)碩士學(xué)位論文。若有腫瘤形成，將其剝離后用 4%多聚甲醛固定，送至廣州生物醫(yī)藥與理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行石蠟切片和 H&E 染色。嵌合體小鼠檢測(cè)鼠嵌合體是來源于兩個(gè)或兩個(gè)以上胚胎或個(gè)體的個(gè)體。1961 年，A.Tarkow胚胎的透明帶去除，聚集形成嵌合體，成功地制作了世界上第一只嵌合體，Garder 將囊胚細(xì)胞注射到囊胚腔，創(chuàng)建了囊胚注射法制作嵌合體。小鼠應(yīng)用于研究胚胎和器官發(fā)育問題，分析復(fù)雜表型，傳遞 ES 細(xì)胞基因組（，獲得基因突變小鼠，或者判斷細(xì)胞系多能性和發(fā)育潛能。本實(shí)驗(yàn)主要用多能性和發(fā)育潛能。技術(shù)流程如下：

圖 2-2 小鼠陰道栓實(shí)體圖鼠稱重后按 40-50 mg/kg 戊巴比妥鈉 75%酒精噴消毒小鼠腹部，再用棉球 1 cm 的橫切口，再在腹壁做一個(gè)同子輕輕夾住左側(cè)睪丸的脂肪墊并將其管在睪丸的下面，，有血管伴行，用燒心送回腹腔，重復(fù)以上步驟夾斷右側(cè)。縫合小鼠腹壁和皮膚。將小鼠放入公鼠與母鼠合籠檢測(cè)公鼠是否結(jié)扎成用結(jié)扎雄鼠與雌鼠交配，盡管雌鼠處于胚胎移植的接收轉(zhuǎn)態(tài)，而且假孕導(dǎo)產(chǎn)生用于囊胚子宮胚胎移植的假孕
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R329.2

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